试剂及材料: 1)PBS 步骤: 1.制备第一层胶:100ml 0.8%正常熔点胶,加盖盖玻片,4℃固化10min; 2.制备第二层胶:轻轻地去除盖玻片,在第一层胶上滴加75ul含1×10000个细胞的0.6%低熔点胶(cell与凝胶比例为1:5),加盖盖玻片,4℃固化10min; 4.取出玻片,用PBS缓冲液漂洗3次后置于水平电泳槽内,加入pH13的电泳缓冲液(没过玻片2~3min),放置20min(黑闭)。 3.裂解:去掉盖玻片,将凝胶浸入冰冷的碱性裂解液内(临用前加10% DMAO,1%Triton X-100),4℃裂解1h; 5.电泳:电压20V,300mA,30min 6.取出玻片,用PBS或Tris.Cl,pH7.5漂洗3次,每次3min; 7.染色:胶上滴加3ulEB,加盖盖玻片,24h检测。或者4℃,潮湿,闭光的条件下保有胶片,观察时再染色,镜检。 |
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