一、 图像获取功能

用SPOT拍摄图像的操作流程

1、调节显微镜，直到可以清楚地看到标本；

2、将显微镜的光路转换到拍摄状态；

3、打开控制软件，点击屏幕右下角的拍摄协议窗口，选择一个合适的协议（SPOT软件提供了一套厂家设定的协议，可满足大多数情况下的拍摄，但最好还是自己设置一下）；

4、点击窗口内（右上角）的LIVE图标，相机开始实时预览，你将看到要拍摄的区域。将焦距调到最清楚（直接调焦，从显示器上就可以直接看到变化），然后关闭LIVE窗口；

5、点击get image拍摄；

拍摄后的图像出现在屏幕上，至此已经完成了一次基本拍摄。

注意 ：

1、开机顺序最好是先打开相机电源，再打开控制软件；

2、拍摄时一定要注意显微镜的光路是否转换到拍摄状态；

3、上一次所作的所有的参数设置都会被计算机默认保留，所以拍摄前最好察看一下；

4、spot 2及以前的型号没有LIVE功能；

5、请确定滤光块的位置是否正确（明场时使用BF）；

SPOT软件提供的厂家设定协议可满足大多数拍摄环境，如果这些协议不能满足实际需要,可对参数进行修改或建立自己的协议。

二、建立自己的拍摄协议

1、点击Setup菜单；

2、选取Image Setup；（以上两步也可以直接在屏幕右下脚菜单处点右键，选择Add）；

3、选取Add；选择拍摄的模式（如图所示）；

4、为协议取一个名字；

5、设定各项参数（参见后面所述）；

6、点击确定。 这时自己的协议将出现在屏幕右下角的协议窗口，以后拍摄时只须选中即可，不必再进行逐项设定。

三、设置拍摄参数操作流程

1、点击Setup菜单；

2、点击Image Setup；（以上两步也可以直接在屏幕右下脚菜单处点左键，选择modify）；

3、选取一个拍摄协议，点击Modify；

选取图像类型（Bits per Pixel）

（8位单色/12位单色/24位RGB/36位RGB/48 位RGB）
　　拍摄彩色图像一般选择24位RGB，因为一般第三方软件均支持此方式。如果是拍摄荧光，在滤光片的选择上最好选择要拍摄的荧光的颜色，这样速度快，图像质量好（例如拍摄绿色荧光，则只选择绿色滤光片）。

选定曝光方式（Exposure Type）（自动曝光/手动曝光）

一般情况下选择自动曝光，这样质量会较好，方便调节参数。

GAIN值的选择

Gain值所代表的意思是为CCD芯片中最亮的一点所容纳的电子数，其中1为容纳最多电子数为满井电子数，2代表为容纳最多电子数为满井电子数的1/2，依此类推，16代表容纳电子数为满井电子数的1/16.拍摄透射光时，可以选择任意值，推荐为8；拍摄荧光时，推荐使用1或2。

调节曝光因子（Adjustment factor）

数字越大，实际曝光时间越长。适用于拍摄荧光，特别是以下情况：如果在拍摄的图像中有一点特别亮，其他的都很暗，并且这个亮点是一个杂点或是不需要的，我们需要的则是那些暗的。这时我们就可以调节这个值（如调节为2.3，他的意思就是在实际的曝光基础上乘以一个2.3的系数），这样再拍摄，就会发现原来的亮点会曝光过度，但是原来不清楚的图像现在则变清楚了。

BINNING选择

光线弱时，可选定BINNING方式，以提高灵敏度，节省时间。数字越大，灵敏度越高；推荐拍摄弱荧光时使用2*2；选择时要注意以下情况：如果要做图像叠加，则一定要使用相同的Binning，否则图像会错位！

选择曝光顺序

如果相机为3次曝光相机，则曝光顺序可以调整（特别是拍摄比较容易淬灭的荧光时），将容易淬灭的荧光先拍摄。顺序即是RGB的各种组合（R-代表红色，G-代表绿色，B-代表蓝色）。

选定芯片成像区域

Full Chip　整个芯片成像
　　Center　中心区域成像，通过设定百分比决定区域的大小
　　Region　设定成像区域的坐标
　　点击要采取的后处理方式，Spot会在获取图像之后对其进行相应处理后再显示在屏幕上。

四、常用的拍摄技巧

1、在使用LIVE功能时，选择cortrol可以调节一些参数（如预览图像显示的颜色，Binning格式，图像的亮度速度与质量的关系等。其中在拍摄弱荧光时推荐Binning使用2*2或3*3，亮度值可稍微调高一点，速度与质量的选择偏向于速度）。

注：这些参数的默认值一般为：bright为1.0，grama为1.4。

2、拍摄时如果不想把整幅图片都拍下来的话，也可以这样作：先拍摄一幅图片，从中选择感兴趣的区域，用鼠标划出来，然后选择camera——Set Chip Imaging Region，然后会出现对话框，点击OK，这样再拍摄时就会只拍摄您感兴趣的区域。

注：做这些工作的前提是载物台一定不能动，如果要拍摄另一个视野则先要把成像区域改为full chip（做法如下，右键点击右下角的拍摄放案，选则modify，再选择full chip即可）。

3、明场拍摄方案一般就使用默认的数据就可以.拍摄荧光时，可能要作一些调整。例如如果荧光比较暗，或淬灭比较快，就可以把Binning改为2*2，Gain值改为2或4。

4、白平衡功能（适用于明场拍摄）有时由于灯的缘故拍摄出来的图片会整体发黄，或发蓝，这个时候就可能要使用白平衡来解决问题。具体做法如下：在屏幕菜单中选择White Balance（右侧一个天平形状的图标），将载玻片聚焦好然后移到一个空视野的区域，光路转到拍摄状态，点击begin——OK即可。

注：（白平衡与光的强度密切相关，光的强度变化了可能就需要作白平衡）。

5、平场较正有时拍摄出来的图片会四个角发暗，或由于镜头较脏，使得图片上一直有一些暗斑，具体调整方法如下：首先将载玻片在目镜下聚焦好，然后拿走玻片，将光路转换到拍摄状态，点击camera——Get Flatfield Image，相机自动拍摄，然后会出现对话框，给他起一个名字点击OK就可以了。

五、图像编辑功能

图像增强

使用图像增强功能可以提高图像质量，突出重点。做法如下：

1、点击Edit菜单；

2、选取Adjust RGB（或HSL/HSV），再选定Adjust Histogram，移动滑动条（两个三角）来改变图像显示效果；这个操作主要是为了去掉拍摄时的噪音，使图像变得更清晰，后面的那个三角向前拉会使图像变得更亮（在拍摄单色光的时候特别要调节一下，只选择单色光波峰所在的区域，图像效果最好）；

3、选取Filter，可对图像进行平滑，锐化等操作。

图像叠加

1、点击Edit菜单；

2、选定Merge Images；然后选则要叠加的图像（即白色框内的显示的位置），也可以从硬盘上直接选则图像，将其合成一幅图像。该功能在拍摄多探针荧光图像等情况下非常有用。

剪切图片

1、在图片上选择感兴趣的区域用鼠标划出来，然后点击edit——crop即可；

2、伪彩色填充；

3、有时我们拍摄荧光使用mono模式拍摄，但又想将他填充成单彩色图像（或选定edit——Convert to grayscale，可将彩色图像转换成灰度图像；再选择change pixel bit depth，选择8bit）；可以选择edit——set palette就可以使用伪彩色来填充。

伪彩色方案的设定

系统已经给了4个默认设置，但有时不符合心意，此时我们就可以自己设置颜色方案。做法如下：点击setup——palette——add在左侧的调色板上选则符合心意的颜色，然后为它起一个名字，点击OK。使用时在set palette里的下拉菜单里就有你自己设的方案，就可以直接使用，如果觉得颜色不符合心意，还可以修改，步骤是setup——palette——选择要修改的方案的名字——modify就可以修改了。

六、图像测量功能

SPOT提供了方便的测量功能，可直接再画面上进行测量并显示出实际测量值。在测量之前，需要先进行校准。

校准

1、先拍摄一张定标尺的图像；

2、点击Setup菜单；

3、选定Calibration Setup，出现对话框；

4、选定Add；

5、为将要建立的标准取一个名字（最好是显微镜的物镜倍数）；

6、将光标放在图像上，此时光标变成十字，在定标尺图像的某一位置点击，再将光标移到另一位置点击（最好是包括整数个一黑一白跨度）；

7、在对话框最后一行键入实际长度和单位（一般一黑一白代表100个微米）；

8、点击OK。

添加比例尺

1、点击edit——add calibration mark；

2、选择拍摄时的物镜的倍数，然后在要加比例尺的图像上用鼠标左键点一下，就可以将比例尺加到图像上，要保存点击stamp；比例尺的大小，方向，颜色，位置，线条的粗细，都可以调整，方法如下：在对话框上直接选择要修改的对象，调整即可；

注意：在作操作前最好将原图保留，因为一旦最后存储之后，将没有办法再修改。

测量

1、点击Edit菜单；

2、选取Add Measurement，出现对话框；

3、选定一个测量标准（一般为拍摄时的物镜倍数）；

4、选定测量类型（直线距离/角度/曲线距离/区域面积）；

5、在图像上移动，点击鼠标即可进行测量，结果会显示在图像上；

6、如果想保留测量结果，点击对话框上的Stamp即可。

注意：在作操作前最好将原图保留，因为一旦最后存储之后，将没有办法再修改。

七、图像标注功能

SPOT的图像标注功能可在图像上添加箭头、线条、矩形、文字、图片、水印、拍摄日期、备忘录等元素，将图像作必要的描述，突出重点，方便发表和查阅。

选择标注工具

1、点击Edit菜单；

2、选定Add Annotate，此时屏幕上方菜单发生改变，出现Object，Attribute，Done三个新选项；

3、点击Object；

4、选定自己需要的元素或选择view——show tools来使用快捷菜单。在图像上拖动鼠标，即可将其添加在图像上。

改变工具样式

1、如果对某工具的样式不满意，点击Attribute；

2、选定要修改的工具，设定其参数即可；

3、在图像上标注完成之后，点击Done，保存所作的操作，即可恢复原来的菜单。

添加备忘录

可以将这张图片与其他片子的不同之处记下来，方便以后的查阅，对比等。文字将会与图片一起保存为一个文件。以后只要打开图片点击meno即可看见以前写的记录，并且可以任意修改做法如下：

点击edit——meno，将所有信息写下即可（支持中英文）。

八、常见问题及解决方法

屏幕提示：Exposure time is too short
　　原因：光线太强。
　　解决：将光源调弱即可，或使用档光片等。

屏幕提示：image too dim
　　原因：可能是光线太暗。
　　解决：将光强调亮即可；也可能是由于没有将显微镜的光路转换到拍摄状态。

一直计算曝光时间，不进行其他操作
　　原因：显微镜的目镜与VIDEO端口的切换拉片没有拉出，相机没有感光或是由于拍摄时没有将光路转换到拍摄状态。
　　解决：将拉片拉出即可。

偏色严重（整幅图片偏黄或偏蓝）
　　原因：白平衡不正确。
　　解决：作一次自动白平衡。具体步骤如下：
　　1、点击White balance图标；按照屏幕提示，移动玻片，使视野中只有空白区；点击OK；
　　2、软件将自动计算白平衡，并提示你确认将所得到的白平衡存储到哪一个拍摄协议中去；
　　3、选定一个拍摄协议，点击OK（白平衡只针对透射光显微照相）。图像模糊
　　原因：聚焦不清楚。
　　解决：用FOCUS或LIVE功能来聚焦。
　　1、点击Focus或LIVE图标，画面上出现一个矩形框和一个对话框；
　　2、点击矩形框将其拖到画面上比较容易看出聚焦效果的区域或自己感兴趣的区域；
　　3、在对话框内选定用来辅助聚焦的滤镜的颜色（不同的颜色会影响画面更新的速度；比如拍摄绿色荧光时，使用绿色滤镜会获得较快的更新速度）；
　　4、在对话框内点击Begin，转动显微镜的调焦旋钮，同时观察屏幕上的聚焦结果；聚焦满意时，点击Stop；再拍摄图像。

拍彩色图像时颜色显示失真，缺少层次
　　原因：显示器色彩显示模式错误。
　　解决：进入Windows的控制面板，将显示器设置设为24位彩色或更高。

打开软件时屏幕提示得不到相机的响应，打开后多数图标变灰
　　原因：打开软件时相机电源没有打开。
　　解决：打开电源，点击Camera菜单，选Initialize，软件将自动和相机建立联系；图标恢复正常显示。

相机不工作
　　原因：可能电源保险丝烧断。
　　解决：更换保险丝即可（事先征得CTS工程师的认可）。

汞灯点不亮
　　原因：1.汞灯使用寿命以完；2.由于汞灯启动的电压很高，有时插线板上连接了过多的设备，造成电压过低，引起故障。
　　解决：更换灯泡，将汞灯电源使用单独的插线板。

拍到的画面范围和目镜视野相比太小或不一致
　　原因：只使用了局部芯片来成像。
　　解决：点击Setup菜单，选Image setup，在成像区域选择部分，将芯片成像区域设成更大的数值或选择Full chip。

想修改某个拍摄协议，却发现出现的对话框变灰而无法修改
　　原因：使用了锁定协议的功能。
　　解决：点击对话框右下角Lock前面的点选框，框内的勾号消失，即可对各项参数进行修改了。

启动软件时，提示驱动有错误
　　原因：错误的关机，使得驱动程序部分丢失。
　　解决：将原驱动卸载，重新安装即可。

九、显微数码图像分析系统工作条件

1、电源系统：220V/50Hz。

2、工作环境参数：
　　湿度：60%以下（整套设备包括有精密光学组件，所以必须防潮，以免镜片受损）。
　　温度：22摄氏度左右。

3、工作台面积：2.4m X 1m（工作台上需要放置显微镜，电脑，打印机等设备，需保证足够的操作空间）。

4、防尘措施：窗户密闭，挂厚窗帘，黑色为佳（整套设备包括有精密光学组件，所以防尘措施很重要；另外考虑到进行显微镜荧光观察的需要，应配备黑色窗帘）。