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标签: 微量定容测压法 植物 呼吸速率

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一、原理

微量检压计不仅用来研究有机体或部分组织的呼吸作用和发酵作用,而且也可以研究有关O2与CO2及其它气体交换的反应。如光合作用,酶的活性等。测压法的原理是在固定体积并保持恒温的密闭系统中,气体产生或消失的总量,可以利用气体定律计算求得。

二、材料、仪器设备及试剂

(一)材料:待测的小麦、水稻萌发种子。

(二)仪器设备:1. 瓦布格呼吸计(微量呼吸检质计);2. 移液管;3. 量筒;4. 小镊子;5. 称量瓶。

(三)试剂:1. 20%KOH;2. 凡士林;3. 橡皮筋数根;4. 吸水纸;5. Brodie氏溶液:NaCl 23g,牛胆酸钠5g,溶于500ml水中,另加少许染料(酸性品红)使溶液染色,并加数滴浓麝香草酚酒精溶液作为防腐剂。

三、实验步骤

(一)种子吸氧量的测定

1. 取不同处理种子若干(体积约0.5ml左右),称其鲜重,然后用排水法测定其体积,先用滤纸将种子外面水分吸干,另取10ml量筒一个,内盛4~5ml的水,将种子放入量筒内观察水分上升体积,二次水分体积之差即为种子体积,将种子取出,用滤纸吸干附在种子外表的水分,然后将种子放入反应瓶的底部,再加0.5ml水

2. 在中央小槽内加入20%KOH0.2ml,为了增大吸收CO2的能力,可用1×2cm滤纸折叠后插入中央小槽内。并在中央小槽口上涂上少量凡士林,防止碱液逸出。

3. 侧管的玻璃棒涂以凡士林后塞紧。压力计口亦涂上凡士林和反应瓶连接,转动反应瓶,使封口凡士林呈透明为止,然后用橡皮筋将反应瓶固定在压力计上。

4.将压力计固定在水槽上,并打开活塞,平衡10~15min,在此过程中要检查反应瓶是否漏气。

(二)空白试验(作温压计用):

因压力计左管口是与大气相通,实验时室内气压或水槽温度微小变化对读数均有影响,为此,必须进行校正。校正方法:即反应瓶中除不加种子外,其他处理与测压计完全相同。

(三)测定:

当反应瓶内温度与水槽温度平衡后,将压力计上的活塞关闭。开始振荡。并记录开始时间,每隔15min记录测压计及温压计左管液面高度,读数时关闭振荡器,并将压力计的右管液面调至150mm处,再记录左管液面高度,共计四次(共1h,读数时不能将活塞打开!)将结果按下表记录。

四、结果计算(一)求K值(二)根据实际压力差值(h1.求氧的吸收量(μl)=h×K;

计算呼吸速率(耗O2)呼吸速率(μl/g/h)=h×K/[样品重(g)×时间(h)]

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