生命经纬知识库 >>所属分类 >> 植物学实验技术   

植物组织培养

标签: 植物 组织培养

顶[0] 发表评论(42) 编辑词条

植物组织培养是把植物的器官、组织乃至单个细胞,应用无菌操作使其在人工条件下,能够继续生长,甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下,原来已经分化停止生长的细胞,又能重新分裂,形成没有组织结构的细胞团,即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”,已经“脱分化”的愈伤组织,在一定条件下,又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官,这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用,吲哚乙酸( IAA )和 6 –苄基氨基腺嘌呤( 6 – BA )的比例,决定了根和芽的分化。

近年来,组织培养作为一种研究技术,已广泛地应用于许多学科中,它不仅对理论研究有重要意义,并已展现了十分广阔的应用前景。

一、原理

植物组织经过脱分化作用,形成愈伤组织,经过再分化作用,愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官,最终形成完整的植株。早在1957 年Skoog 即发现培养基中植物激素的类型和它们的比例,对再分化过程起着重要的作用。

二、试剂与仪器设备

1、试剂

乙醇、IAA 或2,4–D 、HgCl 2(或次氯酸钠)、6- 苄基氨基腺嘌呤(6-BA )、MS 培养基

2、仪器设备

培养室,高压灭菌锅,水浴锅,解剖刀,三角烧瓶(100mL),烧杯,量筒,培养皿,棉线,接种箱或超净工作台,分析天平,长镊子,剪刀,容量瓶,移液管,牛皮纸。

三、实验步骤

1、 配制培养基

(1)愈伤组织诱导培养基:MS 培养基(蔗糖含量为10 g/L ,2,4–D 含量为2 mg/L ,琼脂10 g/L )。

(2)试验培养基:在MS 培养基中按表1加入IAA 和6–BA 。

吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解,6-苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1mol/L HCl 溶解,然后用蒸馏水稀释,再加入培养基中。

                                  表1      试验培养基中IAA 和 6–BA 含量

序号

IAA ( mg/L )

6-BA ( mg/L )

相对比值

1

0

2.0

 

2

0.2

2.0

1:10

3

0.5

2.0

1:4

4

1.0

2.0

1:2

5

2.0

2.0

1:1

6

2.0

1.0

2:1

7

2.0

0.5

4:1

8

2.0

0.2

10:1

9

2.0

0

 

2、培养基灭菌

将配好的培养基加入琼脂加热溶解,调至pH 5.8 ,趁热分装于100mL 三角烧瓶中,每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后,用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶(管)口,并用棉线扎牢,然后在高压灭菌锅中121 ℃(1kg/cm 2)下灭菌20min 。取出三角烧瓶放在台子上,冷却后备用。接种操作所需的一切用具(如长镊子、解剖刀、剪刀等)及灭菌水,需同时灭菌。

3、诱导产生愈伤组织

(1)取健壮的烟草茎数段,每段约5cm 长,于烧杯中用0.1% 氯化汞(升汞)浸泡20 min ,取出用无菌水洗3 ~4 次,置于无菌培养皿中,在接种箱中按无菌操作要求剥去外皮(接种箱事先用紫外灯灭菌 30 min),用解剖刀切成5 mm 厚的圆片(弃去开始一片和最后一片),用长镊子将它接种在诱导培养基上,注意圆片的切口朝向培养基,每瓶接种4 片,接种后扎好瓶口。

(2)将已接入植物组织(外植体)的三角烧瓶,培养在25 ℃温室中,每星期检查l ~2 次,剔除材料已被杂菌污染的三角烧瓶,3~4 周后产生愈伤组织。

(3)选取愈伤组织生长良好的三角烧瓶,用解剖刀将愈伤组织切下,转移到含有不同激素的试验培养基中(也可以连同原来的外植体一起转移),每瓶放1~2 块,仍培养在25 ℃温室中,每周1~2 次观察不同处理的三角烧瓶中,愈伤组织分化情况,直至长出根和芽。长成的幼小植株即为“试管苗”,可移栽于花盆中。

附件列表


→如果您认为本词条还有待完善,请 编辑词条

上一篇自花授粉植物有性杂交技术 下一篇Handbook of Plant Nutrition(电子版)

词条内容仅供参考,如果您需要解决具体问题
(尤其在法律、医学等领域),建议您咨询相关领域专业人士。
0

收藏到:  

词条信息

admin
admin
超级管理员
词条创建者 发短消息   

相关词条