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外植体的灭菌

标签: 植物组织培养 外植体 灭菌

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接种用的材料表面,常常附有多种多样的微生物,这些微生物一旦带进培养基,就会迅速滋生,使实验前功尽弃。因此,材料在接种前必须进行灭菌。灭菌时,既要将材料上附着的微生物杀死,同时又不能伤及材料。因此,灭菌采用何种药剂,什么浓度,处理多长时间,均应根据材料对药剂的敏感情况仔细敲定。

经常使用的灭菌剂有次氯酸钠、过氧化氢、漂白粉、溴水和低浓度的氯化汞等。使用这些灭菌剂,都能起到表面杀菌的作用。但氯化汞灭菌后,汞离子在材料上不易去掉,必须将材料用无菌水多清洗几次。

外植体的灭菌工作应在接种室或接种箱内无菌的条件下进行。

花药的灭菌 用于组织培养的花药,按小孢子发育时期要求,实际上大多没有成熟,花药外面有萼片、花瓣或颖片、稃片保护着,通常处于无菌状态。所以一般只对整个花蕾或幼穗进行灭菌。如茄(Solanum melongena L.)的花药,灭菌时先去掉花蕾的萼片,用70%酒精擦洗花瓣,然后将整个花蕾浸泡在饱和漂白粉上清液中10分钟,再经无菌水清洗2~3次,即可接种。这一灭菌程序,也适用于其它植物花药的灭菌。

果实及种子的灭菌 灭菌前,先将果实、种子用纯酒精迅速漂洗一下或将种子浸泡10分钟。对于果实,一般再用2%的次氯酸钠溶液浸泡20~30分钟甚至几小时,持续时间视种皮硬度而定。对用作胚或胚乳培养的种子,如种皮太硬,则在灭菌前先去掉外种皮,再用4~8%次氯酸钠溶液浸泡8~10分钟,用无菌水清洗后,即可剖出胚或胚乳进行接种。

 茎尖、茎段及叶片的灭菌 灭菌方法与花药的灭菌方法相同。对于茎叶,因为暴露在空中,且生有毛或刺等附属物,所以灭菌前应该用自来水冲洗干净,用吸水纸将水吸干,再用70%酒精漂洗一下。然后,根据材料的老、嫩和枝条的坚硬程度,用2~10%次氯酸钠溶液浸泡6~15分钟,用无菌水冲洗3次,用无菌纸吸干后进行接种。

根和贮藏器官的消毒 这类材料大多埋于土中,材料上常有损伤及带有泥土。灭菌比较困难。灭菌前,要用自来水清洗,并用毛刷或毛笔轻轻刷洗去掉污物,吸干后用70%酒精漂洗一下,再用0.1~0.2%的氯化汞灭菌5~10分钟,或用6~8%次氯酸钠溶液浸5~15分钟,接着用无菌水清洗及用无菌纸吸干,然后进行接种。

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