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测定大鼠心肌AGEs含量标准操作规程(SOP)

标签: 大鼠心肌 AGEs SOP

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名称:测定大鼠心肌AGEs含量标准操作规程(SOP)

关键词:大鼠心肌;AGEs含量

目的:观察糖基化终末产物的生成量,用于判定药物对糖尿病心肌病大鼠的疗效。

主体内容:

制备心肌匀浆组织后→离心(3000rpm,10min,4℃)→弃上清,沉淀物用去离子水洗3次,加入5ml氯仿-甲醇(2:1)→放入摇床内,4℃振荡过夜后,加入2ml甲醇,0.5ml去离子水→离心(3000rpm,10min,4℃),分别用甲醇,去离子水水化,冲洗→Hepes缓冲液冲洗2次后,将其放入5ml的Hepes缓冲液,4℃过夜→离心(3000rpm,10min,4℃),祛缓冲液→加入1ml包含Ⅴ型胶原酶(290U/ml)的Hepes液中,加入防腐剂(甲苯2µl,氯仿2µl)→放于摇床内,常温振荡消化24小时→离心获取上清液,避光静置1h→用荧光分光光度仪在370/440波长下测定荧光强度,其值用空白胶原酶校正。AGE含量以每mg羟脯氨酸(HYP)所含荧光强度为一个任意单位,用AU(arbitrary unit)表示,即AU/mgHYP。

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