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性功能障碍的药效学试验

标签: 性功能障碍 药效学

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阳痿系临床最常见的性功能障碍,其病因、病情复杂,既有病理原因造成的性功能低下,又有生理原因造成的性功能衰退。补肾壮阳药主治肾虚阳痿、早泄等性功能障碍。在此探讨功能性性功能障碍药效学研究的设计和方法。

1、去势大鼠模型

1.1 原理 成年雄性大鼠去势,可复制肾阳虚模型。

1.2 方法 1月龄的SD或Wistar大鼠,体质量100~120g,雄性大鼠在戊巴比妥钠麻醉下行双侧睾丸切除术,术后肌注青霉素2万u/kg,连续3d,分组给药,每日1次,连续15~30d,末次给药后1h,将电刺激仪的刺激电极置于大鼠阴茎部位(一电极放于尿道外口,另一电极置于阴茎皮肤),给予电刺激,频率50Hz,波宽1ms,电流强度4mA,记录自刺激开始至阴茎勃起的时间(勃起潜伏期)。将1只雄鼠与2只雌鼠合笼,观察20min内雄鼠对雌鼠的嗅舔和爬跨次数。最后将动物处死,取血测定血浆睾酮、雌二醇的水平,及对前列腺、精液囊、包皮腺、肛提肌的影响(质量、形态学)。

1.3 模型复制成功的指标 模型组大鼠的阴茎勃起潜伏期显著延长,对雌鼠嗅舔和爬跨次数较正常对照组减少,生殖器官质量降低。

1.4 注意点 ① 可以调节刺激电流强度,使正常对照组大鼠阴茎勃起潜伏期为10~60s;② 动物捉拿的方法和电极刺激部位应一致;③ 根据情况观察时间可适当延长。

2、房劳过度致肾虚证模型

2.1 原理 中医认为,房室不节,损伤精气,房劳过度可致肾虚。雄性大鼠可与一动情期雌鼠交配数次,当出现呆滞疲劳状态时,投入一只新的动情期雌鼠又可兴奋起来进行交配。本模型利用雄性大鼠与雌性大鼠尽量交配,连续数月,可出现肾虚的表现。

2.2 方法 雌性大鼠180~200g,每只皮下注射长效避孕针剂0.2 ml(每ml含炔诺酮庚酸酯50mg及戊酸雌二醇5mg),2~3d后雌鼠即进入动情期。将每只雄性大鼠与1只进入动情期的雌性大鼠共笼。次日,将无阴道栓的雌性大鼠随机交换,3d换1批,换下的雌鼠休息7~10d,再经处理,循环使用。每鼠仅用3~4次。如此饲养100d左右。

2.3 模型复制成功的指标 模型组大鼠精液囊的质量和血浆睾酮含量降低,而肾上腺质量增加。

2.4 注意点 本模型成功的关键在于完善的饲养条件和有足够数量的高质量的雌性动物。

3、肾阳虚证模型

3.1 原理 大剂量氢化可的松促进动物蛋白质、脂肪的大量分解,降低糖的利用及抑制免疫等作用,使动物出现体质量减轻、活动减少、反应迟钝、肢尾冷、蜷曲拱背、毛松等形寒肢冷的阳虚现象。

3.2 方法 瑞士种或昆明种雄性小鼠,体质量18~22g,肌肉注射氢化可的松25 mg/kg,每日1次,连续3d,可造成小鼠肾阳虚证。

3.3 模型复制成功的指标 小鼠体质量降低,体温下降,活动能力减弱,耐寒耐疲劳能力下降。

3.4 注意点 模型复制时间可参照动物表现而定,阳虚表现不明显时可延长模型复制时间。

4、大鼠交配试验

4.1 原理 从未与雌性大鼠合笼过的成年雄性大鼠,在与雌鼠合笼后20min内,约有一半雄鼠开始追逐雌性大鼠及完成射精。观察受试药物对成年大鼠交配的影响。

4.2 方法 3月龄的SD或Wistar大鼠,体质量200~250g,雄性大鼠按体质量随机分为对照组和给药组,连续给药15~30d。雌性大鼠在戊巴比妥钠麻醉下行双侧卵巢切除术,术后肌注青霉素2万u/kg,连续3d,卵巢切除2周后分组给药。试验前48h皮下注射苯甲酸雌二醇20ug/只,4h前再皮下注射黄体酮注射液50ug/只。试验于19:00~22:00进行。将雄性大鼠单独放入笼中(55cm×35cm×20 cm)5min,使其适应环境,然后每笼加入1只雌鼠,观察记录20min内雄鼠扑捉潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次扑捉雌鼠的时间)、扑捉次数、扑捉率、交配潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次与雌鼠交配的时间)、交配次数、交配率。

4.3 试验成功的指标 本试验是观察受试药物对正常成年大鼠交配能力的影响。

4.4 注意点 ① 观察交配试验应在弱光、安静条件下进行;② 观测条件应一致,各组交替、同时进行,观测者也应各组交替观察,以减少或排除不同观测时间、不同观测者对结果的影响;③ 根据具体情况可以延长观察时间。

成年雄性小鼠,体质量20~25g,每天给受试药物1次,连续给药15~30d。末次给药30min后,取成年雌性小鼠与雄性小鼠合笼(雌:雄=3:1),置于暗室内观察,记录合笼至第1次交配的时间(交配潜伏期)及20min内交配次数。

5、重复悬吊应激复制小鼠性行为缺损模型

5.1 原理 以动物尾部为支点将其悬吊于水面上,一造成动物身体和心理应激。动物接受同种应激原一定时间后可产生耐受性,通过延长悬吊时间可增加应激强度,避免动物产生耐受现象。

5.2 方法 昆明种小鼠,体质量25~30g,雄性小鼠以尾部为支点将其悬吊于水面上,以前肢刚接触水面为准。水温(20±2)℃。每天1次,连续10d。并逐渐延长应激时间:第1~3d悬吊2h,第4~6d悬吊3h,第7~9d悬吊4h,第10~11d悬吊5h。悬吊时间为9:00~14:00。每次解除悬吊后10min给药,连续15~30d。悬吊第10d开始,将雄性小鼠放入单只饲养的动情期雌性小鼠笼中,观察记录20 min内如下性行为:舔、跨骑和交配的发生数、发生率及跨骑潜伏期,并取血测定血浆皮质酮和睾酮水平。亦可取雌性小鼠与雄性小鼠合笼(雌:雄=3:1),置于暗室内观察,记录合笼至第1次交配的时间(交配潜伏期)及20min内交配次数。

5.3 模型复制成功的指标 重复悬吊应激5d,小鼠性行为开始下降,重复应激10d,小鼠性行为明显降低,表现为舔、跨骑和交配次数明显减少,跨骑潜伏期显著延长,跨骑和交配率明显降低。血浆皮质酮明显增高,而睾酮水平显著降低。

5.4 注意点悬吊时小鼠间应有一定的距离,以免小鼠相互攀爬,同时应注意小鼠自身的攀爬。

6、果蝇性活力试验

6.1 原理 果蝇具有世代周期短,容易饲养,繁殖力强的特点,是研究延缓衰老药物及行为遗传学的良好材料。本试验将药物加入培养基中,观察药物对果蝇性活力的影响。

6.2 方法 选用黑腹果蝇,将1d龄成虫用乙醚麻醉后分出雌雄,在基础培养基上饲养30d后,移入含有定量药物的培养基上继续饲养,定时更换培养基,每组用雌蝇150只、雄蝇100只,在含药培养基上饲养10d后,将同一组的雌、雄蝇以3:2的比例混合于空培养管中,观察记录混合后1h内果蝇的交配数及交配时间。基础培养基参考配方为:每100g培养基中含玉米粉10g、蔗糖10g、琼脂1.2g、干酵母粉1.5g,苯甲酸钠0.1g,水约77g。

6.3 试验成功的指标 本试验是观察受试药物对正常黑腹果蝇性活力的影响。

6.4 注意点 ① 果蝇生长的最适温度为2 0~25℃ ,大于30℃会导致果蝇不育或死亡, 低温则其生活力下降,故一般采用21~22℃,相对湿度50%~60%;② 药物在培养基中应分散均匀,培养环境温、湿度应恒定,并保持无菌条件;③ 果蝇应取1月龄后的中老年蝇,试验前,雄蝇未有过交配行为;④ 为观察准确,试验时以雌蝇30只、雄蝇20只为宜。

7、讨论

7.1 方法学评价 成年雄性大鼠切除双侧睾丸去势所致的肾虚证模型,与临床上阳痿证尚有一定的差异,但本模型操作较简单,重复性强,既可以观察药物的壮阳作用,又可以观察药物对肾虚证的作用,所以较常采用。强烈的身心应激或长期慢性应激参与并加快机体的衰老过程。应激性性功能低下模型具有与临床接近的特点,方法简单,指标可靠,所需动物价廉易得。房劳过度致肾虚证模型,通过频繁交配,可使健康雄性动物出现性功能低下,这不仅仅是泄精所致,高度且频繁的兴奋对中枢及植物神经系统产生不良影响也参与这一病理过程。与临床上房劳过度致性功能低下接近,但所需周期长,实验动物多,费用大,现在较少采用。果蝇与哺乳动物之间亲缘关系较远,因此实验结果仅供进一步研究时参考。

7.2 观测指标阳痿可由多种原因引起,壮阳药的核心试验是增强阴茎勃起及交配功能,其他试验可从不同方面说明其药效。药物对幼年雄性动物生殖器官、附性器官发育的影响,对动物免疫功能的影响,抗应激能力等,可根据新药特点酌情选做。

7.3 阳性对照药根据新药的特点,可选用男宝胶囊、雄狮丸、海马三肾丸、参茸丸、参茸大补丸、三肾丸、五子衍宗丸等。

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