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哺乳类实验动物病理剖检方法

标签: 哺乳实验动物 病理剖检 方法

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一、基本要求

(一)实验动物背景资料记录

(1)实验动物来源、种类、年龄、性别、原编号、体重、临床症状等。
  (2)剖检时间、地点,麻醉方法、时间、麻醉者,处死方法、解剖者、记录人、温度、湿度。
  (3)其他指标:动物剖杀前禁食(不禁水)时间一致,为12h。

(二)体表检查

一般用于组织学取材的实验动物剖杀前应先隔离检疫7~10d,用于实验组和对照组动物的病理剖检视不同动物实验的要求而定。剖检前的体表检查项目如下:

1、发育状态

体格发育是否与年龄、品种相称,各部发育比例是否正常,有无畸形。

2、营养状态

丰满还是消瘦,检查时可用手抚摸实验动物背、腰部,营养良好时,背腰部厚实,皮肤弹性好。营养不良时,背腰部椎骨突出,肋骨明显。

3、精神状态

实验动物的自主活动、运动情况,对外界的反应(迟钝或亢进)、步态如何。

4、感觉器官

眼睛的瞳孔是否清晰等,有无分泌物,眼睑有无发炎及红肿,球结膜颜色变化,有否潮红、苍白、黄染或发绀。

5、呼吸系统

呼吸动物如呼吸次数、节律、有无呼吸困难;上呼吸道检查如鼻腔分泌物多少、有无喷嚏和咳嗽;必要时可通过听诊检查肺部。

6、消化系统

采食与饮水观察,包括食欲废绝、减退、亢进和异嗜,口腔黏膜颜色和气味。有无呕吐、腹泻、便秘,肛周有无污物,粪便数量、硬度、颜色、气味等。

7、被毛和皮肤

检查皮肤颜色、温度、弹性、有无创伤、脓疡、疥癣、湿疹,毛发色泽、疏密、有无脱落。

(三)病理取材基本要求

(1)  病理检查应分层次进行,先进行一般外观观察,然后剖检观察,再进行光镜详细检查。
  (2)  通常选择正常与病变交界处组织,即包括病变本身及病变周围组织。
  (3)  对照组动物相同器官取材时,选材部位应尽量一致。
  (4)  肉眼看不到的明显病变时,各试验组选取标本位置应一致。
  (5)  所选组织应包括脏器全部层次结构或重要结构,如肾应包括皮质、髓质和肾盂。
  (6)  体积大和分叶的器官,应视不同组织选取多个部位,小器官可整体取材并固定,如淋巴结、扁桃体、甲状腺等。
  (7)  胃肠标本应将内容物冲洗掉,以免内容物影响组织固定,产生自溶。
  (8)  所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性,不宜过厚或过薄,一般厚约3~5mm,大小为1.5~2cm2
  (9)  切取组织时不要挤压,使用锋利刀具,少用剪刀,勿选用被器械钳压过的部位。
  (10)标本取材要熟悉,尽可能快的完成整个过程,特别是易自溶的组织,如肠道、脑、腺体等。
  (11)剖检记录应客观、详细,用形象描述而不能用诊断的病名来代替。
  (12)同一实验中的对照组和实验组动物应交叉剖检,严格统一各种条件和操作,尽量避免各种可能的干扰因素。

二、病理剖检基本操作

(一)常用器械及使用方法

1、解剖刀

主要用于切开和分割软组织,刀片宜用血管钳(可持针钳)夹持安装,避免割伤手指。

常用的持刀法有以下4种:执弓式、抓持式、执笔式、反挑式。

2、手术剪

用于分离与剪开

3、血管钳

用于分离和钳夹组织,钳夹缝合针和布巾等。

4、手术镊

用于夹持组织,以利于解剖和缝合。

5、拉钩

用于牵引和暴露

(二)基本操作

1、切开

在同一平面上时,先绷紧组织,将刀刃与平面垂直,用力要得当,一次垂直切开,切口整齐而不偏斜,禁止斜切和锯切,以减少损伤。切开多层组织时,一般应按组织层次分层切开,避免损伤深层组织器官。

2、组织分离法

可用锐性分离法,使用刀、剪等锐性器械直接切割,如皮肤、黏膜、精细结构和紧密连结组织的分离;也可用钝性分离法,使用分柄、止血钳、剥离器,手指等分离,如肌肉,疏松结缔组织等的分离。

3、结扎

用丝线打结的方法扎组织和血管,参与缝合器官和皮肤。

4、止血

大量出血导致胸、腹部积血使剖检视野模糊不清,可能会影响和干扰病变的辨别和取材,因此动物剖检有时要求止血。

(1) 纱布块压迫止血法。剖检过程中,为观察病变性质和部位,辨清组织和神经、血管通路,以及对较广泛的毛细血管渗出,可用纱布按压施行短暂性的止血,但不可用纱布来回擦拭血液,以免损伤组织。

(2) 钳夹止血法。先用纱布块止血,看清出血点或血管后用止血钳的尖端垂直对准出血点,迅速而准确的钳夹并捻转,使血管闭塞而止血。

(3) 结扎止血法。用于动脉出血或较大的血管出血。

三、剖检取材程序

(一)实验动物尸体的固定,通常为仰卧位固定。

(二)剖检顺序多为先腹腔后胸腔,再脑、脊髓、骨髓、皮肤肌肉等。取材顺序基本与此相同。

(三) 检查内容

1、位置

有无移位、异位

2、大小

体积增大、缩小或肿大

3、色泽

整体或局部颜色的增减改变。

4、附加物

有无出血、积液、粘连。

5、质地

硬、韧、软等。

6、切面

多汁、泡沫状、带血、脓汁、干燥等。

7 、中空器官的黏膜面

有无出血、溃疡、增厚、隆起物等。

(四)剖检和取材程度

1、腹腔和腹腔器官

沿腹部正中线切开剑突至肛门之间的腹前壁,再沿最低位肋骨分别向左右两侧切开侧腹壁至脊柱两旁,完全暴露腹腔器官。观察有无积液、血液和炎性渗出物,如有则用吸管吸出,测量容积并经离心沉淀涂片检查,必要时作细菌培养。检查粘膜是否光滑,有无充血、瘀血、出血、破裂、脓肿、粘连、肿瘤、寄生虫等,膈的紧张度及有无破裂。

(1)脾脏。检查大小、厚薄、硬度、性状、色泽、有否肥厚、破裂等。然后沿长轴将脾切成两半,切面要平整,检查脾小梁、红髓、滤泡的色泽,切面的出血量。

(2) 胰腺。检查胰腺色泽和硬度,切面检查有无出血。

(3) 胃肠。检查胃的大小、胃肠道浆膜面的色泽,有无粘连、肿瘤、寄生虫结节。然后沿胃大弯、肠系膜附着部依次剪开胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠。观察胃内有无异物,内容物的气味及性状,除去内容物,检查黏膜颜色,有无充血、出血、化脓。采用边剪开边观察的办法检查肠管,观察肠内容物数量、性状,有无气体、血液、异物、寄生虫,肠黏膜皱壁有无增厚、水肿、充血、粘液量、溃疡、坏死、淋巴组织性状及有无炎症。

(4) 肾脏。首先检查肾脏大小、硬度、被膜是否容易剥离,肾表面的色泽、平滑度,有无疤痕、出血变化。然后检查切面皮质和髓质的色泽,有无瘀血、出血、化脓和梗死。注意观察皮质和髓质交界处的切面是否隆突,以及肾盂、输尿管、肾淋巴结的性状,有无肿瘤及寄生虫等。

(5) 肝脏。首先检查肝脏的大小、被膜的性状、边缘的厚薄、实质的硬度和色泽,以及肝淋巴结、血管、肝管等的性状。然后作切面,检查切面的出血量、色泽,肝小叶性状、有无脓肿、肝坏死等变化。

(6) 肾上腺。观察外形、大小、色泽和硬度,作纵切和横切,检查皮质和髓质的色泽及有无出血。

2、盆腔器官

(1) 膀胱。检查膀胱的大小、尿量及色泽,黏膜有无出血、炎症和结石等。

(2) 雄性生殖器官。检查睾丸、附睾、凝固腺、前列腺有无粘连、出血、水肿、积液等。

(3) 雌性生殖器官。沿子宫体背侧剪开子宫角,检查子宫内膜的色泽、有无充血、出血、炎症等,观察卵巢和输卵管有无粘连、出血、水肿、积液等。

3、胸腔、口腔及其器官

用镊子夹住胸骨剑突,剪断膈肌与胸骨的连结,提起胸骨,在胸椎两侧分别剪断左、右侧胸壁的肋骨,取下整个胸壁,打开胸腔,依次取出胸腺和心脏。将下颌骨的两下颌支内侧与舌连结的肌肉切断,将咽、喉、气管、食道与周围组织分离,用镊子夹住气管向上提起,剪断肺与胸膜的连结韧带,然后将咽、喉、气管、食道连同整个肺脏一并取出。如有积液应观察其数量和性状,尽量吸取,测量容积并涂片,检查胸膜色泽,有无出血、充血或粘连。

(1) 心脏。剪开心包膜,暴露心脏,注意心包的光泽度及心包内液体的情况,心脏的大小、外形、心外膜情况。自下腔静脉入口处至右心房作直线剖开,从此直线中点沿心脏右缘剖至心尖部,从距离心尖部与心室间隔右侧1cm处平行地剖至肺动脉;检查右心房、右心室、三尖瓣、肺动脉瓣、腱索有否病变。自左右静脉入口处将左心房直线切开,沿心脏左缘剖至心尖部,再从距离心尖部与心室间隔左侧1cm处平行地剖开左心室的前壁和主动脉,检查二尖瓣、主动脉瓣、腱索有无病变,左心房、左心室内壁有无出血和感染。自冠状动脉口起剪开前降支和旋支,在主动脉根部右侧,于右心室的心外膜找到右冠状动脉主干,先横切一刀,再剪至后降支;观察有无粥样硬化和血栓等。

(2)  口腔。检查牙齿的变化,口腔黏膜的色泽、有无外伤、溃疡和白斑,舌黏膜有无出血、外伤及舌苔的情况。

(3)  咽喉。观察喉头、会厌软骨黏膜的色泽、淋巴结的性状及喉囊有无积脓。

(4)  鼻腔。检查鼻腔和鼻中隔黏膜的色泽、有无出血、炎性水肿、结节、糜烂、溃疡穿孔及疤痕等。

(5)  下颌及颈部淋巴结。检查下颌及颈部淋巴结的大小、硬度、有无出血和化脓等。

(6)  气管。检查气管有无出血、黏液量等。

(7)  肺脏。检查肺的色泽、有无出血、炎症、肺气肿、肺萎缩、肿瘤等。

(8)  其他器官。胸腺,甲状腺,扁桃体等的色泽、有无粘连、出血、水肿等。

4、颅腔及脑

以猴为例,剥离颅顶部软组织,沿眉弓至枕外隆凸上0.5cm处的连线,用弓形锯环绕该线锯开颅骨外板及板障,然后用丁字凿轻轻凿开内板,揭开颅盖,此时可见覆盖于脑表面的硬脑膜,切开硬脑膜暴露脑组织,在距颅骨锯口断端上0.5cm处,从前向后环行剪开硬脑膜,枕部的硬脑膜应保留1.5cm长,防止取脑过程向后推压脑组织时,枕骨断端损坏枕叶脑组织。向后方轻轻揭起硬脑膜及大脑镰,暴露脑组织,用手指从额骨前上方伸入颅前窝,轻轻推压大脑额叶,直至见到筛板上的嗅球为止,切断嗅丝与嗅球的联系,将嗅球与脑一齐拉起,见到视神经和视交叉时立刻停止,在脑底附近依次切断颈内动脉、视神经,再将脑向后拉,可见到垂体及漏斗,继续将脑向后拉起,切断连于脑的脑神经。从脑干腹侧面把手术刀伸入枕骨大孔,切断脊髓,即可将脑取出,用流水冲洗干净备用。新鲜脑很软,易变形和受挫伤,操作过程中必须用手扶托,取出脑后应立刻用纱布包裹,浸泡固定液中保存,以免变形。

检查软脑膜、硬脑膜血管充盈情况,脑回之间的脑沟中液体的数量与色泽,脑表面凸起或凹下的地方是否明显,可用手触膜判定其硬度。用刀将脑做一水平切面,保留胼胝体,暴露侧脑室,注意检查尾状核有无出血、软化灶。侧脑室内容物数量、性质,然后将脑做多处切面,检查有无变化。

四、脏器测量和称重

(1) 解剖后应迅速将脏器称重,以免水分蒸发造成差异,特别是肾上腺等小器官的称重。

(2) 脏器称重前应尽量将周围脂肪组织和结缔组织剔除,并用滤纸吸去脏器表面血液及体液,特别是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的器官,更要新鲜称重,防止器官干燥失水而重量减轻。

(3) 空腔器官称重前,应清除其腔内液体,如心脏应除去血块。

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