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琼脂平板电泳

标签: 琼脂平板电泳

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琼脂凝胶结构均匀,含水量大,吸附量小,因此电泳速度快,电泳结果区带整齐,分辨率高,易染色,制成薄膜标本保存方便。所以琼脂凝胶电泳最常用。

(一)试剂及材料

1.pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液

2.优质琼脂

3.玻板、打孔器等

(二)操作方法

1.以巴比妥缓冲液配成1%~1.5%琼脂,溶化后制成2mm~3mm的琼脂板。

2.打孔 在玻片的1/3处打孔,孔径3mm~6mm。也可用剃须刀片挖一小槽。

3.加样 将血清样品直接加入孔内,如非血清样品则尽可能用pH7.4PBS透析后加样;也可以不打孔,用滤纸片蘸取样品直接插入以小刀划开的琼脂裂缝中。

4.电泳 将样品端放入负极,用滤纸(纱布、棉布均可)2~3层搭桥(与玻片同宽度),电压3V/cm~6V/cm,电流强度1.5mA/cm~3mA/cm。

5.断电 电泳2h~4h,断电。

6.固定、染色、观察结果。

正常血清经琼脂平板电泳后分成的区带如图2-1:

 
图2-1 血清经琼脂平板电泳后分成的区带

(三)注意事项

1.为了观察泳动情况,以掌握断电时间,可在加样的同时,加一滴伊文斯兰染色液即可。

2.开始电泳时,电压要小一些,以逐渐升至所需要得强度。

3.为了获得较好的区带结果,采用较小的电压(或电流),适当延长时间是可取的。

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