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内切酶的特性、酶解与琼脂糖凝胶电泳

标签: 内切酶特性 酶解 琼脂糖凝胶电泳

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学习和掌握限制性内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电泳的操作方法,理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具,琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定DNA片段的有效方法。

限制性核酸内切酶:

是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。是体外剪切基因片段的重要工具,所以常常与核酸聚合酶、连接酶以及末端修饰酶等一起称为工具酶。

琼脂糖凝胶电泳:

是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下带负电的核酸分子就可以向阳极迁移。琼脂糖凝的浓度影响给定大小的线状DNA的迁移率,因此采用不同浓度的凝胶可以分离不同大小范围的DNA片段。

EB:即3,8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲锭溴盐,(Ethidium Bromide)。它能够插入DNA分子中的碱基对之间而与DNA结合。由于EB分子的插入,在紫外光的照射下,凝胶电泳中的DNA条带呈现出红色荧光,易于检测。可以检测10ng 的DNA。

质粒pCMV-Myc-T10 NEB 标准分子量片段(1kb DNA Ladder)EcoR1 和Xho1 核酸内切酶(Takara)EcoR 1和Xho 1酶解缓冲液(10×H buffer)琼脂糖TBE或TAE缓冲液(10×)溴化乙啶染色液(10mg/ml)上样液(6×):0.25% 溴酚兰,40%(W/V)蔗糖水溶液或30%的甘油。电泳仪,电泳槽,紫外透射仪,凝胶成像仪,一次性塑料手套等.

1)质粒DNA的酶解(自提质粒pCMV-Myc-T10)

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  • 更新时间: 2009-12-09

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