生命经纬知识库 >>所属分类 >> PCR技术   

PYRO测序用于SNP基因分型

标签: SNP基因分型

顶[0] 发表评论(38) 编辑词条

其实是一种段片段焦磷酸测序技术,在测序引物的引导下,完成段片段(含snp)的测序,从而实现基因分型。缺点:不能检测长片段,对于重复序列没有办法。

原理简介

1.测序引物与单链,PCR扩增的DNA模板相结合。然后将其与DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶,以及底物APS和荧光素一起孵育。

2.四种dNTP之一被加入反应体系,如与模扳配对,此dNTP与引物的末端形成共价键,dNTP的焦磷酸基团(PPi)释放出来。而且释放出来的Ppi的量与和模板结合的dNTP的量成正比。

3.ATP sulfurylase在adenosine 5´ phosphosulfate存在的情况下催化PPi形成ATP,ATP驱动luciferase介导的Luciferin向oxyluciferin的转化,oxyluciferin发出与ATP量成正比的可见光信号。光信号由CCD摄像机检测并由pyrogram™反应为峰。每个光信号的峰高与反应中掺入的核苷酸数目成正比。

4.TP和未掺入的dNTP由Apyrase降解,淬灭光信号,并再生反应体系。

5.然后加入下一种dNTP。最终待测序列顺序,即可从反应光强的信号峰中读出。在此过程之中有几点值得注意的是,在体系中使用的是dATPS而非dATP,因为dATPS不是荧光素酶的底物,而且DNA聚合酶对dATPS的催化效率更高。而且在系统之中,底物的浓度已经最佳化,使得dNTP的降解速度慢于它的掺入速度,ATP的合成速度快于水解速度,其中三磷酸腺苷双磷酸酶的特异浓度,可以保证降解完全,使系统复原。

附件列表


→如果您认为本词条还有待完善,请 编辑词条

上一篇先进的PCR:方法和应用 下一篇判断PCR阳性的标准

词条内容仅供参考,如果您需要解决具体问题
(尤其在法律、医学等领域),建议您咨询相关领域专业人士。
0

收藏到:  

词条信息

admin
admin
超级管理员
词条创建者 发短消息   

相关词条