我们做实验,有时会用到别人已经用过的引物,但如何才能知道这个引物是否正确呢?我通常利用prime 5.0来验证引物。 下面我用常用的内参GAPDH将验证过程介绍如下: GAPDH的引物序列来自一片外文文献: 上游:AATGCATCCTGCACCACCAA 下游:GTAGCCATATTCATTGTCATA 所得片断为516bps。 首先在pubmedline中查到GAPDH的mRNA序列,如图 然后打开primer 5.0,点file→new→DNA sequence,将上面的mRNA序列复制到new sequence 框内,注意选择as is: 先加上游引物,点Primer→s→edit primers, 将上游引物复制到引物区,注意选择as is。点analyze→prime,可见下图,引物与反义链匹配。 |
点ok,重复刚才的操作,加下游引物。点Primer→A→edit primers,将下游引物复制至引物区,注意此时应选择reversed。可见下游引物与正义链匹配。 最后点ok,即可见下图 |
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