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如何提高PCR扩增的保真性

标签: PCR扩增 保真性

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下游应用为基因筛选、测序、突变检测和分子诊断等等的用户,对PCR保真性要求很高。

降低PCR扩增的错误率可以通过使用各种具有高保真性的DNA聚合酶来实现。

DNA聚合酶的保真度用错误率来表示,包括碱基错配率、PCR产物突变百分数等。

在目前已发现的所有耐高温DNA 聚合酶中,Pfu酶的出错率最低,保真度最高(见附表)。

除对酶进行选择,研究者也可通过优化反应条件来进一步减少PCR突变率,包括优化缓冲液组成、耐热聚合酶的浓度及对PCR循环条件进行优化等。

附表: DNA聚合酶的扩增错误率

耐热DNA聚合酶

碱基错配率

PCR产物突变百分数(%)

Pfu DNA Polymerase

1.3×10-6

2.6

Taq DNA Polymerase

8.0×10-6

16.0

VentR ® DNA Polymerase

2.8×10-6

5.6

Deep VentR ® DNA Polymerase

2.7×10-6

5.4

Tfl DNA Polymerase

8.3×10-6

16.6

Tbr DNA Polymerase

9.5×10-6

19.0

ΜlTmaTM DNA Polymerase

55.3×10-6

110.6

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  • 更新时间: 2009-12-09

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