一、总RNA提取 1. 取200mg组织,放到1.5mlEP管中,加入1mlTrizol剪碎。 2. 震荡30s。 3. 加0.2ml氯仿,剧烈摇动30s,室温3min。 4. 12000×g,4℃离心,15min。 5. 吸上层无色水相,移入另一EP管中(约0.5ml)。 6. 加等体积异丙醇,-20℃,30min。 7. 12000×g,4℃离心,10min。在管底部可见微量RNA沉淀 8. 弃上清,加75%乙醇1ml,振荡。 9. 7500×g,4℃离心,10min。 10. 弃上清,用滤纸小心吸取残留液体,室温干燥5-10min。 11. 沉淀溶于20μlDEPC水,取1μl加入79μlDEPC水测OD260/OD280 12. 计算浓度与纯度,-70℃保存。 二、逆转录合成cDNA第一链 反应体系如下 混匀快速离心一次 反应条件如下 -20℃ 冰箱冻存 |
三、PCR反应 混匀快速离心一次 反应条件如下 PCR产物-20℃冰箱保存 取PCR产物8μl 加5×Loading Buffer 2μl 2%琼脂糖凝胶电泳120V。 100mA 30min 溴化乙锭染色,凝胶成象仪成象并保存结果。 |
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