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实验原理：

体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒，选用转化和筛选技术，可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中，DNA可在生物体系中大量扩增，繁殖，保存以及表达目的基因的产物，这是PCR体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术，所获得的，不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研，医药生产和生物发酵等领域。

质粒转化不同细菌有不同的转化效率，转化效率的高低与实验的成败直接相关，通常转化效率可达105－107转化子/μg DNA。获得高转化效率的关键是感受态体菌的制备。感受态就是细菌吸收转化因子的生理状态，只有发展为感受态的细胞才能稳定摄取外来的DNA分子。pUC18的LacZ基因区域当有DNA插入时，LacZ基因失活，转化进入大肠杆菌并在含有IPTG和X-gal培养基生长时，会产生白色的克隆，不含插入片段的pUC18质粒进入宿主细胞生成蓝色菌落。

DNA分子转化分以下几步：

1、吸附－－双链DNA分子吸附于受体菌表面；

2、转入－－双链DNA分子解链。一条链进入受体菌，另一条降解；

3、自稳－－外源质粒DNA分子在细胞内复制成双链；

4、表达一供体基因随同复制子同时复制，分裂，转录翻译。

实验试剂：

LB培养基

质粒DNA（含Amp抗生基因），受体菌

CaCl₂ 0.1M

Amp

实验过程：

1、感受态细胞制备及CaCl2处理：

1) 将宿主菌在琼脂培养基平板上划线，37℃培养1６～20小时。

2) 挑取单菌落转入20ml LB培养基锥瓶中，37℃振荡过夜。

3) 从中取2ml菌液转入50ml LB培养基中37℃振荡培养4－5小时，测OD₁₀₀达0．4～0．5。

4) 培养物于冰上10分钟。

5) 转入－50ml离心管，于4000RPM下4℃离心10分钟。

6) 弃上清，倒置离心管1分钟，流尽剩余残液然后加入10ml用冰预冷的 0. 1mol/L CaCl₂，置冰上10分钟。

7) 4,000rpm 4℃离心10分钟，弃上清。

8) 加入2ml，0.1M CaCl₂悬浮细胞，于4℃过夜。

2、倒皿铺平板：

1) 按照各组转化反应的混合物，控制不同的选择性培养基(20 ml/皿) 。LB固体培养基(100 ml) Amp（60μg/ml） Tet(40μg/ml)供连接混合物转化，pUC18转化用, 共5皿 LB固体培养基 (100 ml) Amp (60μg/ml) X-gal (40μg/ml) IPTG(24μg/ml),供连接混合物转化，pUC18转化用,共5皿。

2) 转化反应前一天，先铺好平板。

3) 取各组反应物在平板上涂布。

4) 培养皿倒置于37℃培养箱中过夜。

5) 观察转化子出现的情况。

转化：

（1）将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记，然后按下述进行：