【目的与要求】

了解IVC系统和超净工作台的原理结构、维护、操作程序和注意事项。

【仪器与材料】

IVC、超净工作台、一次性手套、口罩。

【步骤】

一、师讲述IVC系统和超净工作台的原理结构、维护、操作程序和注意事项。
　　二、学生在教师指导下进行各项基本操作。

【内容】

一、原理和结构

IVC笼盒由耐高温（至少能耐150～160℃高温以上）的透明塑料材料制成，一套笼盒由上盖、底盒、食槽、水槽、锁紧扣、进出风口组件、硅橡胶密封垫圈等组成有的上盖上还有一个称之为生命之窗的空气过滤网。独立通风笼盒是IVC设备的关键所在，它要具有一定的密闭性，能防止盒外空气的进入，以减少可能的感染来源，又要能让洁净空气流畅进入，并在盒内形成良好的气流动或扩散，与盒内气体混合并把笼盒内的废气排出。笼盒一般有两种基本形式，而且大多申请了专利保护。一种为笼盒的通排气是阀门开闭式，即上架时打开，取下时自动关闭。阀门有照相机快门式和单片弹簧开关式等。另一种为盒内终端过滤保护式。过滤膜的形式有圆筒状和平板状两种。过滤膜大多为亚高效或高效过滤材料制成。

二、操作程序

1．IVC操作使用前的准备工作
　　（1）开启超净工作台风机，净化台内环境。打开工作灯达到工作照度。
　　（2）检查超净工台中准备的各种灭菌饲养和实验物品（饲料、垫料、酸化水及实验用物）是否齐全。若需更换笼盒。检查灭菌笼盒准备情况，并用不锈钢推车移至超净台移门边。
　　（3）检查喷雾器喷洒效果及超净台内外擦抹用的药液是否已配置好。
　　（4）打开房间内排风系统。排除打开笼盒时逸出的有味气体。
　　（5）检查IVC机组各种表头指针及目视各笼盒内的动物情况，估测IVC运行情况。
　　（6）记录影响实验动物繁殖、生长、发育的主要环境参数，如温度、相对湿度、日温差、笼盒内外压差等。

2．IVC操作使用程序及规范
　　（1）人员带好一次性口罩、帽子及医用乳胶手套。（注意：带手套前应洗净手及指甲，若指甲太长应适当修剪，以免戳破医用乳胶手套）。
　　（2）用双手轻轻抬起IVC笼盒外端，沿笼架搁挡向外移出笼盒，放在超净工作台旁的不锈钢小推车上。
　　（3）用药液喷雾器充分喷洒双手手套外表及IVC笼盒的外面，消毒灭菌并沾粘住表面的尘埃，防止进入超净台时被层流气体吹扬。也可用带手套的双手浸入药液容器中，捞起并拧干药液毛巾，擦干手套外液滴，同时擦一下笼盒的外表。
　　（4）打开超净工作台移门（高度只要能使笼盒进入即可），把笼盒移入超净工作台。
　　（5）适当拉下超净工作台移门（高度只要操作者二手在台中活动自如即可）。打开IVC笼盒盖底之间的紧固扣并打开笼盖。侧卧放在一边。　

（6）目视笼盒中动物的生活情况，作出添料、加水、换盒、幼仔断乳分窝及动物实验的决定，并实施：
　　①添加饲料：啮齿类动物为自由采食（因实验需要，限量供给除外），采食时间大多在夜晚，白天目视盒中应富余供给。添加时，用小剪刀剪开辐照料铝泊包装，加满料斗即可，根据动物的数量，一般加一次料可维持三天左右。
　　②添加饮用水：水是动物生存的重要营养要素：动物不能断食，更不能断水。啮齿类动物的饮水量不大，一瓶250ml的水对4～8只小鼠，维持三天足足有余。断水的主要原因是水瓶或饮水口漏水，防止断水的关键是选择优质水瓶和灌水后瓶盖的拧紧。打开笼盒。取出水瓶、观察水瓶中剩余水的水质是否混浊，如发现混浊，立即更换水瓶。换上一瓶已清洗过水瓶并经灭菌的饮用水。若剩余水清澈，未发现有污染的情况。则可使用原饮水瓶，在超净台中直接通过龙头灌装超滤酸化水，继续使用。灌装毕，关紧龙头阀门。防止泄漏，腐蚀超净工作台台面。
　　③更换笼盒：先将灭菌过的笼盒移入超净工作台中，放入适量灭菌垫料，然后打开需换笼盒的金属网盖，用消毒灭菌过的大镊子（镊头最好套上一段乳胶管），挟住动物尾巴。把动物移至新的笼盒，盖上金属网盖。加足饲料及饮用水，盖上盒盖，扣上紧固扣最后把原笼盒上的动物卡片移插至新的笼盒上。并把换下的笼盒放入专用塑料袋中，扎紧集中外运处理。当然，更换笼盒也可只换笼盒底盒，不换盒盖，这要视笼盒的使用情况而定。更换笼盒时，有时也可顺便检查一下盒盖上的终端过滤器情况，并作适当处理（互相对换，换膜等）。
　　④幼仔断乳分窝：方法同更换笼盒。
　　⑤动物实验：按上述方法，打开笼盒盖，在超净工作台内再次对带有乳胶手套的双手用75%浓度的酒精棉球擦试消毒灭菌，从笼盒中取出动物，放在小动物手术台上，麻醉、捆绑四肢、手术、止血、缝合，或灌药、注射、采血，或处死、解剖、取标本等。实验完毕，顺便检查一下动物饲料、饮水及笼盒的污染情况。该添就添，该加则加，该换就换，一切视情况而定。
　　⑥做完超净工作台中的饲养和实验工作，盖好笼盒，打开超净工作台的移门，取出笼盒，放在IVC笼架上原位（如需更换位置，则另作别论），对准笼架进出风口，沿笼架搁挡，轻轻推入，接口后在笼架固定钮内放下即可。
　　⑦依此操作第二个笼盒或做下一个组合的动物实验。

三、注意事项

1、IVC系统安装的房间必须符合普通级环境标准。

2、房间配有功率适当的、能调控温湿度的空调设备。

3、应有换气装置和供系统使用的排气管道。

4、配备“万级”专用超净台一台及喷雾专用喷枪一把。

5、IVC动物实验室使用的实验动物，必须来自有生产许可证的实验动物供应单位，并附有相应级别的合格证书。在引进IVC动物实验室前，先应检查核对动物运输盒上的各种标志（动物品种、品系、规格、数量等），并检查包装箱及过滤膜有否破损，确认一切正确无损，方可移至IVC动物实验室。

6、实验器材及小型仪器进入屏障系统IVC室，按屏障系统物品进入程序规范进行。