生命经纬知识库 >>所属分类 >> DNA技术   

标签: 受体菌 感受态细胞

顶[0] 发表评论(25) 编辑词条

 一、目的与原理

当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时,即为感受态,而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。

二、材料和方法

1. 材料:大肠杆菌

2. 仪器:

离心机,恒温摇床,恒温水浴,超净工作台,冰柜

3. 试剂

LB培养基,0.1M MgCl2,3mM氯化六氮合高钴

TFB:10Mm MES(pH6.3)

45Mm MnCl2

10Mm CaCl2

10Mm KCl

三、操作步骤

大肠杆菌在LB培养基平板上划线培养12-16小时,挑取单菌落于LB培养基摇瓶培养大肠杆菌到对数期。取1ml培养物7000rpm,离心3min,收集菌体。再重复一次。冰浴放置。用预冷的氯化镁悬浮菌体7000rpm离心3min。收集菌体,冰浴放置。用预冷的氯化钙悬浮菌体,冰浴15min, 7000rpm离心3min。收集菌体,冰浴放置。加入200μl预冷的氯化钙(或TFB),放置于冰浴,即得感受态细胞,此细胞可现用,也可进行下步操作。将悬液分装于无菌离心管中,投入液氮,然后储于-70℃保存。

四、结果 (略)

五、注意事项

一般地,新制备的感受态细胞48h后转化效率降低,15d后失效。因此,感受态细胞不能保存太久,4℃保存一周,但-80℃可保存1年。用试管分装可避免反复冻熔,损伤感受态细胞。

附件列表


→如果您认为本词条还有待完善,请 编辑词条

上一篇什么是克隆技术 下一篇Phenol/chloroform?Extraction?of?DNA

词条内容仅供参考,如果您需要解决具体问题
(尤其在法律、医学等领域),建议您咨询相关领域专业人士。
0

收藏到:  

词条信息

admin
admin
超级管理员
词条创建者 发短消息   

相关词条