1、将适量的菌体悬浮于500μl溶菌酶溶液（2%）中，37℃温育1hr 左右至完全溶菌，

2、加入500μl碱性SDS溶液（0.3mol/L NaOH, 2%SDS），立即振荡混合完全，

3、打开管盖，在70℃放置15min（对大于20kb的质粒则最好放在55℃， 30min），然后于水浴中冷却至室温，

4、加入100μl酸性苯酚/氯仿溶液，用混合器振荡至液体彻底混合均匀，12000rpm离心5min,移取上清液，弃去白色中间层。

5、用中性苯酚/氯仿重复抽提直至看不见（或非常少）中间层为止。

6、在上清液中加入1/10体积的3M NaAc溶液和1倍体积的异丙醇沉淀5分钟（或2.2倍体积的无水乙醇沉淀1h），12000rpm离心8min，

7、用70%乙醇洗涤沉淀两次。

8、干燥后加一定量的TE（ddH₂O）缓冲液溶解。

另：可使用抽提总DNA的试剂盒，将总DNA与质粒DNA一起抽提。