问：请教我现在测定氨基酸（只是打算测定其中的天门冬氨酸和谷氨酸以及丙氨酸三种氨基酸）：现用岛津液相，LC-10AT的泵和SPD-10A的检测器，色谱柱ods C18柱(250 X 4．6mm)，检测波长254nm，柱温40cc，流速lmL·min～，流动相A：0．1mol·L- ，醋酸钠溶液(pH6．5)一乙腈(93：7)，流动相B：乙腈一水(8o：20)，并按下述进行梯度洗脱。线性梯度洗脱程序：0．0 min，0％B；13 min，7％ B；23 min。23％ B；29 min，35％ B；35 min，40％B；40 min，100％B；45 min，100％B；47 min，0％B。
空白梯度基线飘移，而且在20多分钟有较大的很宽的峰，每次梯度都是相同的时间和电压如何？我已梯度洗了一夜也是如此啊，请问我这个方法可以测定氨基酸吗？

答：AccQ衍生方法，我做过类似的，供参考：

色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.14mol/L醋酸盐缓冲液（取三水合乙酸钠19.04g，加1000ml水溶解后，加2ml三乙胺，混匀，用磷酸调节pH值至4.95，滤过，即得）-乙腈（90：10）为流动相；检测波长为248nm；柱温37℃。
衍生剂配制 取1.0ml AccQ Flour TM 2B至AccQ Flour TM 2A瓶中，50℃加热5～10min使溶解，即得衍生剂。

衍生量取10μl供试品溶液、对照品溶液分别置于衍生小管中，加AccQ Flour TM Borate buffer（硼酸缓冲液）70ul，涡旋搅拌，在不断搅拌下加衍生剂20ul，密闭，在55℃下加热5min或室温静置45min。

测定法 取本品，精密称取适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含100ug的溶液，精密量取10µl注入液相色谱仪，记录色谱图。另取甘氨酸对照品适量，精密称定，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

注：AccQ Flour TM 2A试剂； AccQ Flour TM 2B试剂； AccQ Flour TM Borate Buffer试剂均由waters公司提供。

答：如果我没有记错的话，你所要测定的三种氨基酸好像在紫外及可见光波长下都没有较明显的特征吸收峰，应该考虑一下采用柱前或柱后衍生HPLC法测定，可参考http://www.biox.cn/bbs/post/view?bid=117&id=9621918&sty=1所讨论的方法试试。