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RT-PCR
词条创建者:admin创建时间:12-09 22:22
标签: RT-PCR 反转录

摘要:RT-PCR用于对表达信息检测或定量;检测表达差异或不必构建cDNA文库而克隆cDNA;灵敏度好、易操作(与Northern印迹、Rnase保护分析、原位杂交及S1核酸酶在内的RNA分析技术相比)。本篇文章来源于网络,如有异议请联系我们,我们[阅读全文]

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RT-PCR
词条创建者:admin创建时间:12-09 22:22
标签: RT-PCR PCR 反转录

摘要:RT-PCR是将RNA模板的反转录(RT),和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。此技术灵敏而且用途广泛,可用于检测产生的转录产物,分析表达的水平,构建克隆cDNA产物。 本篇文章来源于网络,如有异议请联系我们,我们将在3个[阅读全文]

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RT-PCR步骤
词条创建者:admin创建时间:12-09 22:22
标签: RT-PCR 反转录 PCR 实验步骤

摘要:总RNA提取1. 取200mg组织,放到1.5ml EP管中,加入1ml Trizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿,剧烈摇动30s,室温3min。4. 12000×g,4℃ 离心,15min。5. 吸上层无色水相,移入另一EP管中(约0.5ml)。6. 加等体积异丙醇,-2[阅读全文]

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RT-PCR步骤
词条创建者:admin创建时间:12-09 22:22
标签: RT-PCR 步骤 反转录 PCR

摘要:一、总RNA提取1. 取200mg组织,放到1.5mlEP管中,加入1mlTrizol剪碎。2. 震荡30s。3. 加0.2ml氯仿,剧烈摇动30s,室温3min。4. 12000×g,4℃离心,15min。5. 吸上层无色水相,移入另一EP管中(约0.5ml)。6. 加等体积异丙醇,-2[阅读全文]

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RT-PCR引物设计原则和方法
词条创建者:admin创建时间:12-09 22:22
标签: RT-PCR 引物设计 原则 方法

摘要:在NCBI上搜索到该基因,找到该基因的mRNA,在CDS选项中,找到编码区所在位置,在下面的origin中,Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。打开Primer Premier5,点击File-New-DNA sequence,出现输入序列窗口,Copy目的序[阅读全文]

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RT-PCR引物的选择
词条创建者:admin创建时间:12-09 22:21
标签: RT-PCR 引物 选择

摘要:随机引物适用于长的或具有发卡结构的RNA.适用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。Oligo dT适用于具有PolyA尾巴的RNA.(原核生物的RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA和tRNA不具有PolyA[阅读全文]

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RT-PCR引物的选择
词条创建者:admin创建时间:12-09 22:21
标签: RT-PCR 引物 选择

摘要:随机引物适用于长的或具有发卡结构的RNA.适用于rRNA、mRNA、tRNA 等所有RNA的反转录反应。主要用于单一模板的RT-PCR反应。Oligo dT适用于具有PolyA尾巴的RNA.(原核生物的RNA、真核生物的 Oligo dT rRNA和tRNA不具有PolyA[阅读全文]

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RT-PCR需要多大的细胞量
词条创建者:admin创建时间:12-08 00:36
标签: RT-PCR 细胞量

摘要:DXY网友xiss:理论上50个cell就可以,但是实际操作中我只看到过牛人从100个cell里面提出来过(用LCM逮的),自己提弄过1000cell的。没有用kit。不同点是用BCP代替氯仿,并且加糖原助沉淀,具体的好处不是很清楚,但是BCP用量小[阅读全文]

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RT-PCR中内参的作用?如何选择?
词条创建者:admin创建时间:12-08 00:36
标签:

摘要:内参是看家基因.我们一般用bate-actin,有时也用GAPDH它的作用在于你提取的RNA逆转录成cDNA时,加入的浓度可能会不一致,即使用分光广度计测其浓度,也会有仪器误差.PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都要做,跑出[阅读全文]

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RT-PCR实验步骤
词条创建者:admin创建时间:12-06 23:36
标签: RT-PCR 实验步骤

摘要:一、组织抽提:1.取组织块50-100┦用液氮在研钵中研磨成粉末2.移入玻璃匀浆器加入1ml Trizol 抽打匀浆3.移入1.5ml新离心管用5 ml针头抽打4.冰上孵育5分钟5.离心12,000g4℃5分钟 取上清液移入1.5ml新离心管6.加0.2 ml氯仿[阅读全文]

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