摘要:转染的定义是“将具生物功能的核酸转移或运送到细胞内并使核酸在细胞内维持其生物功能”。其中，核酸包括DNA （质粒和线性双链DNA ），反义寡核苷酸及RNAi（RNA interference）。基因转染技术已广泛应用于基因组功[阅读全文]

摘要:报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而[阅读全文]

摘要:常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA /RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的[阅读全文]

摘要:【求助】转染后Western检测不到高表达量的目的蛋白以前用GFP和连有目的蛋白片段的质粒共转染（瞬时），GFP可以看到，转染效率也不错。western能检测到目的蛋白。随后做稳定转染，用G418筛选，重复两轮，筛出的细胞用同样的步骤[阅读全文]

摘要:爱吃葡萄的猫：我做稳定转染，挑完单克隆用RT-PCR鉴定时，批不出我转染的那段基因表达，但是载体上的新霉素抗性基因能批出来，我鉴定了大概20个单克隆都是这样，开始以为是引物有问题，后来鉴定瞬时转染时能表达，应该就不是[阅读全文]

摘要:问：最近做细胞转染，预筛选稳定克隆，载体为pEGFP-N1，pIERS现在是平行做几个基因，转然后，只有空载体和一个基因可以看到绿色荧光，其余均没有，这会是什么原因呢？怎么补救啊？答：需要考虑的问题有：1.你的细胞和转染的方法，[阅读全文]

摘要:ayao0问：前几天学习做细胞脂质体转染看师姐是用的加血清的培养基，整个过程比以前的方法简单方便了很多不用过四个小时就去换液，可以过了48个小时看转染效率很不好，以前也有人用这种方法做过，很成功。到底这种新的方法[阅读全文]

摘要:ayao0问：转染的时候可以用加血清的培养基吗前几天学习做细胞脂质体转染，看师姐是用的加血清的培养基，整个过程比以前的方法简单方便了很多。不用过四个小时就去换液，可以过了48个小时看转染效率很不好，以前也有人用这[阅读全文]

摘要:问：哪位高手给分别指点一下脂质体和质粒转染的具体过程！答：具体过程都大至差不多，一管混匀质粒，另一管混匀脂质体，脂质体混匀后过几分钟，逐滴加入混匀的脂质体，温柔混匀。但是我想更为重要的有二个方面，一是你用的哪一[阅读全文]

摘要:问：我是新手，我想将一个构建的真核表达载体转染进HEK293细胞中，有人说要先将质粒线性化，也有人说不用，不知道到底应该怎样呢？如果需要线性化，具体怎么操作呢？谢谢了！答：要看你的目的，是做瞬时表达还是稳定表达，做稳定[阅读全文]

摘要:问：想请教各位：我在转染后要挑克隆，现在不知道该怎么做？我是在培养瓶中养细胞，现在用Ｇ４１８杀之后，克隆已经形成，且克隆间间距较大，如果要挑克隆该怎么做呢？谢谢！答：可以用滤纸片消化法对单个细胞岛进行消化。可以根据细[阅读全文]

摘要:问：构建逆转录病毒为载体的DNA（质粒），阳离子脂质体2000（过期的），转染病毒包装细胞pt67，G418筛选，在换液和传代过程中均会有细胞死亡（贴壁细胞漂浮）。求教原因。换液3.6ml DMEM+0.4ml新生牛血清+24μlG418传代用胰酶ph[阅读全文]

摘要:问：我想问个问题关于转染细胞的质粒，必须用试剂盒提取的么？用碱裂解法可以么？抽提两次浓缩一次，测得浓度是8点多，ratio是1.814，可以送去转染细胞不？人的细胞系。答：碱裂解法比试剂盒提取的纯度要低，但是浓度高。其实，剂[阅读全文]