摘要:1、逆转录PCR(RT-PCR)用来扩增RNA的方法。2、竞争逆转录PCR(competitive reverse transcription-polymerase chain rection C-RT-PCR)低丰度RNA定量的好方法。3、多重PCR（multiples PCR）在同一PCR体系中加入多对引物可用于[阅读全文]

摘要:聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时[阅读全文]

摘要:1,IntroductionMore than 15 years after its initial description, the polymerase chain reaction (PCR) has become a standard molecular biology tool and is the most widely used method of nucleic acid ampl[阅读全文]

摘要:由Mullis等在1983年建立的PCR技术已成为分子生物学、遗传学等学科研究领域的经典实验方法。近年来,该技术本身获得了长足发展,可靠性不断提高,在聚合酶链式反应基本原理的基础上,发展了一系列新的概念和实验方法,在生命[阅读全文]

摘要:PCR技术基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增[阅读全文]

摘要:基因突变(gene mutation)是遗传病和肿瘤发生的根本原因，检测与遗传病及恶 性肿瘤发生有关的突变基因(mutant gene)是分子生物学，医学遗传学及肿瘤学研究 的热点，它对阐明遗传病和肿瘤发生的分子生物学基础及其诊断和[阅读全文]

摘要:检索途径在进行文献检索时，我们可根据文献的内部特征或外部特征进行检索。文献的内部特征是指文献所论及事物，所提出的问题，涉及的基本概仿即主题以及文献内容所属的学科范围都是文献的内部特征；文献的外部特征包括题[阅读全文]

摘要:PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。一、污染原因（一）标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严[阅读全文]

摘要:增加PCR的特异性一、primers design（一）理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件1、足够长，18-24bp，以保证特异性.当然不是说越长越好，太长的引物同样会降低特异性，并且降低产量。[阅读全文]

摘要:PCR技术简史一、PCR的最早设想核酸研究已有100多年的历史，本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延[阅读全文]

摘要:Important parameters in the PCR:1.Template DNA quantity (complexity determines ng) and quality (average length)While people typically measure DNA quantity in ng, the relevant unit is actually moles, i[阅读全文]

摘要:Procedure1. Set up the following PCR tube: 5 μl of 10X Taq Buffer 5 μl of 25 mM MgCl2 2 μl of 10 mM dNTPs 10 to 100 ng of template DNA 25 pmol of specific primer 1 25 pmol of specific primer [阅读全文]

摘要:PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位[阅读全文]

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摘要:自从1985 年Karny Mullis 发明了聚合酶链式反应以来，PCR 技术已成为分子生物学研究中使用最多、最广泛的手段之一，而引物设计是PCR 技术中至关重要的一环。使用不合适的PCR 引物容易导致实验失败：表现为扩增出目的带之[阅读全文]

摘要:PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④PCR循环条件。寻找原因[阅读全文]

摘要:PCR引物设计的11条黄金法则一、引物最好在模板cDNA的保守区内设计。DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列[阅读全文]

摘要:第一节 概 述PCR (Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA 或RNA的方法。它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA 片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当[阅读全文]

摘要:PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备②引物的质量与特异性③酶的质量④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上[阅读全文]

摘要:平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分[阅读全文]