摘要:检索途径在进行文献检索时，我们可根据文献的内部特征或外部特征进行检索。文献的内部特征是指文献所论及事物，所提出的问题，涉及的基本概仿即主题以及文献内容所属的学科范围都是文献的内部特征。文献的外部特征包括题[阅读全文]

摘要:凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。 一、琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂糖的溶解温度，把琼脂糖分为[阅读全文]

摘要:PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板DNA序列。因此，引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。要设计引物首先要找到DNA序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级[阅读全文]

摘要:点击下载[阅读全文]

摘要:随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现。尤其是pCR技术问世以后，各种与pCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展。如不对称pCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage[阅读全文]

摘要:实验原理聚合酶链式反应-单链构象多态（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP）技术是在PCR技术基础上发展起来的，它是一种简单、快速、经济的用来显示在PCR反应产物中单碱基突变[阅读全文]

摘要:PCR是DNA的聚合酶链式反应，SSCP 是单链构象多态性。SSCP一般都要采用PCR扩增的方法进行检测，故名PCR-SSCP。此项技术的原理是，不同序列组成的单链DNA或RNA在非变性聚丙烯散胶凝胶中电泳，会因其空间构象不同表现出不同的[阅读全文]

摘要:Possible Causes: Components 可能原因之一——反应组分· Primer concentration is too high.· Primer degeneracy is too high.· Nested primers are required.· New primers[阅读全文]

摘要:PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3&[阅读全文]

摘要:一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有1、模板核酸的制备2、引物的质量与特异性3、酶的质量及4、PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析[阅读全文]

摘要:Possible Causes: Components· Primer concentration is too low.· Primer concentrations not balanced. Make sure primers are present in equal concentrations.· New primers are required[阅读全文]

摘要:PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有模板核酸的制备，引物的质量与特异性，酶的质量及，PCR循环条件。寻找原因亦应针对[阅读全文]

摘要:问题1：无扩增产物现象：正对照有条带，而样品则无原因:1、模板:含有抑制物，含量低2、Buffer对样品不合适3、引物设计不当或者发生降解4、反应条件：退火温度太高，延伸时间太短对策:1、纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加[阅读全文]

摘要:PCR技术的发明1983Kary Mullis 发明1985开始有文章发表1993获诺贝尔奖广泛用于分子生物学研究领域变性--退火--延伸三个步骤1、模板DNA的变性：93℃-95℃左右2、模板DNA与引物的退火(复性)：Ta=Tm-3~5 ℃3、引物的延伸：Taq DN[阅读全文]

摘要:Troubleshooting for PCR and multiplex PCR Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENT VOLUME FINAL CONCENTRAT[阅读全文]

摘要:PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应[阅读全文]

摘要:PCR过程中如果没有找到最佳的扩增条件将会导致产生许多不确定的、不需要的产物，有时甚至没有目的产物；而在另一个极端，又可能没有扩增到任何产物。这时改变已知对引物－模板的忠实性和引物延伸有影响的诸多参数中的一两[阅读全文]

摘要:一、聚合酶链反应的历史回顾1、核酸体外扩增最早的设想由Khorana及其同事于1971年提出：“经过DNA变 性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重视该过程便可克隆tRNA基 因”。但由于当时很难进行测序和[阅读全文]

摘要:1、基本要素和扩增原理基本要素与DNA复制的基本要素是一致的。待拷贝的 DNA 称为模板，它可以是双链 DNA 也可是单链DNA，最后扩增得到的产物是双链状态的。引物是 DNA 复制的先锋，就象结晶过程中的晶核，引导 DNA 的合成。[阅读全文]

摘要:聚合酶链反应即PCR技术，因为其对基因或特定核酸序列在短时间内的极大的扩增效率，已在感染性疾病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、法医学、动植物和考古等的诊断和研究中得到了广泛的应用，并在某些方面几乎是难以替代的。但是，像[阅读全文]