问：纯化后的蛋白质4度保存约15天，怎么分子量发生了变化？

答：蛋白质样品如果是溶液状态的，在4度下顶多保存一个礼拜。15天太长了。估计分降解成很多小蛋白。电泳时出现很多条带。在-20度也就是保存一个月。最好的保存办法还是将蛋白样品冻干成粉末。保存，这样保存的时间会很长。如果条件不具备，-70度也可以。蛋白样品最忌讳反复冻融。

答：蛋白保存应根据对活性的要求及蛋白的种类而定：抗体:除非一些公司特别要求-20℃冻存，一般4℃可稳定一年（无菌，如加叠氮钠），因为抗体是一种具有非常稳定结构的蛋白；要求具有活性的蛋白,最好根据需要小量保存4℃(一周）、-20℃(一个月)、-80℃(六个月)、液氮（基本无限期），反复冻融会导致诸多不良后果，如聚集、修饰、降解、污染等（取决于蛋白浓度、缓冲液成分及蛋白本身的特点）；冻干是一种很好的长期保存法（如条件具备），在大多数情况下可以很好地保存蛋白的活性，但不适于某些蛋白（因有些蛋白对冻干重溶时必然产生的盐离子浓度的急剧变化反应不佳，其活性会永久丧失（应具体对待，尚无规律可循）。

另：蛋白聚集与二硫键形成是两个概念，巯基乙醇只负责维持-SH的游离状态，形成二硫键是一化学反应，产生纯净物，聚集一般只通过一些离子键、范德华力、疏水力形成，可以用物理方法分开。

答：较长时间的保存最好用DTT。在加入缓冲液中24小时内，巯基乙醇被氧化，其后可加速蛋白的失活，而DTT不危及蛋白质的巯基。因此，最好是在制备蛋白质样品的时候用大约12mmol/L巯基乙醇，而长期储存则使用1-5mmol/L的DTT。（见《蛋白质技术手册》）

另外，我有印象看产品目录的时候，看到有一种用于western的试剂盒，提供的试剂可以在还原二硫键之后在巯基上烷基化，这样就防止了二硫键的再次生成。