标签: 细胞凋亡 检测 生化特征
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根据调亡的生化特征的检测方法 一、琼脂糖凝胶电泳 1)常规的琼脂糖凝胶电泳 方法一: 1.收集细胞(5×106)1000r/min,离心5min,去上清。 方法二: 1.离心收集细胞(5×106),PBS(无Ca2+和Mg2+)洗1~2次。 方法三: 1.收集细胞悬液(106细胞),低速离心(1000r/min,离心5min)。 方法四: 1.收集细胞,1000r/min离心5min,去上清。 |
2)琼脂糖凝胶电泳的定量检测 简易末端标记法 1.按常规提取细胞DNA。 细胞DNA的提取 1.细胞悬液离心后,沉淀加消化缓冲液0.5ml,50℃ 3~5h,或37℃过夜。 DNA 5’末端脱磷酸 1.取纯化的细胞DNA 10μg,然后加入:10×CIP 2μl(1U),双蒸水加至50μl。 DNA 5’末端32P标记 1.将脱磷酸样品DNA置冰浴上,再加双蒸水10μl,10×缓冲液2μl,T4多核苷酸激酶10U,32P-ATP 740kBq(20μCi),双蒸水加至20μl。 |
观测 1.取一定量的标记DNA稀释后在1.8%琼脂糖凝胶上点样,50V电泳约2h。 二、原位末端标记技术 1)DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移(ISNT) 1.切片常规脱蜡,梯度乙醇复水化。 2)TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL) 1.切片常规脱蜡,复水,后续过程在湿盒内进行。 |
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