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蔗糖密度梯度离心

标签: 蔗糖 密度梯度 离心

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问:我在做病毒纯化时,需先用超速离心,再用蔗糖密度梯度离心,求助高手用蔗糖密度梯度离心时的转速与超速离心时的转速有联系吗,是相等还是蔗糖密度梯度离心的转速要比超速离心的速度高?若为后者,那又若何决定蔗糖密度梯度离心时的转速?谢谢!

答:1、病毒的纯化时,先用超速离心,你应该查一下资料,看在多大的转速时能够把病毒离心下来.那么你的这一步的转速应该至少不小于该转速,你这一步离心下来的沉淀中含有病毒和蛋白成分。

2、因此你的第二步工作就是要将病毒与其他的蛋白以及杂质分离开,密度梯度离心就可以达到该目的。这时你的离心速度要考虑病毒的大小和蔗糖的密度,使得病毒不能沉淀道管底又可与蛋白层分开。这也可能要具体问题具体分析。

问:谢谢主任的指点,我的病毒直径为100nm。查阅了有观资料,超速离心为21000rpm,45min,我用24000rpm2hr,我用20%-60%连续蔗糖密度梯度离心,该病毒在蔗糖中的浮密度为1.18mg/ml,请问我的糖密度梯度离心速度大概是多少?谢谢!

答:我们实验室IBV (80-100nm)的纯化是:l  病毒纯化浓缩(方法一)
1、冷冻之尿囊液解冻后,4℃,11000rpm离心20min。
2、取上清,加入30%PEG6000(含7.85%NaCl)至沉淀出现(终浓度约为7~8%),4℃放置(或搅拌)过夜。
3、4℃,19000rpm离心20min,弃上清,沉淀用适量TEN溶解。
4、4℃,35000rpm离心3hrs,弃上清,沉淀用适量TEN溶解。
5、4℃,33000rpm蔗糖密度梯度离心2.5hrs(蔗糖梯度:20%, 30%, 40%, 50%, 60%)。
6、抽取40%蔗糖带(含IBV病毒),-40℃保存。

你的我想也差不多吧!

答:你的病毒在蔗糖中的浮密度为1.18mg/ml,如果经过足够长的时间的离心话,那么大概就沉淀在40%-50%靠近40%的这已层中。(40%的蔗糖25度时的浓度为1.176,50%的蔗糖25度时的浓度为1.230)现在必须知道病毒的沉降系数才能算出她你所需要的时间。单纯回答你的离心速度时豪无意义的,必须与时间结合来说明你的离心。一定的速度加上一定的时间才能把病毒分开。

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