问:小弟目前需要建立氨基酸的液相测定方法,其中涉及到衍生化的操作方法以及注意事项,希望大家能够多多帮忙! 答:最近刚做完一个氨基酸类的药物,感觉应该注意以下几点: 1、首先要注意安全。我用的是2,4二硝基氟苯做衍生化试剂,属于剧毒物质,据说有腐蚀性,弄到皮肤上洗不下来(深受受其害)。 2、衍生化试剂的量应该足够。由于试验人把浓度稀释错了,造成峰面积不稳定(让我郁闷了好几天)。 3、衍生化时间要足够。一般时间为60分钟,注意有时候制剂在60分钟内衍生化不完全,可能是辅料有影响。可以做一下比较。 答:氨基酸的HPLC测定一般需要衍生化,目前用得较多的是OPA试剂。 1、OPA柱前衍生HPLC-ECD测定法 2 、柱前衍生Waters,AccQ-Tag法; 3、 安捷伦一级OPA,二级FMOC法。后两种都是紫外检测,其实氨基酸衍生化之后的紫外吸收效果也一般,假如您的样品含量较低,选用此方法很合适,也符合国家的标准;第一种是电化学检测,也需要衍生化,我们做过,最低检出限0.2pmol。 附件:一个方法HPLC-ECD氨基酸的分析 Amino Acid Method方法.rar
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