做好准备工作之后，先把旧的培养基倒掉。再用PBS洗两遍，然后加0.05%胰酶/EDTA，剂量根据培养瓶大小定，一般是25cm ² 的瓶子大约0.8-1ml，轻摇10——15秒，使消化液均匀覆盖瓶底即可，再倒掉。置培养箱3-5分钟(看消化效果而定)，等大部分细胞呈流沙状滑落时，即加入培养基终止消化，一般以1:5左右的比例传代(视计数结果和看细胞长满的程度而定)。

这种方法养比较顽强的细胞很好，既节省步骤，也降低了离心和较长时间消化对细胞带来的损伤，其实大家也可以试试用这种方法养别的细胞。

主要做的还是养骨髓基质干细胞(MSC)，做好准备工作：

1、倒掉旧培养基;

2、PBS洗两遍(如果能很容易就洗去杂质和悬浮的死细胞，洗一遍也可以);

3、加0.05%胰酶/EDTA，(剂量同上)，置培养箱3分钟(看效果而定)，待大部分细胞呈流沙状滑落时，加入一定量培养基(为了计数和按比例传代操作方便)终止消化反应，轻吹匀几次，吸取细胞悬液至15ml离心管(留一滴计数)，1400rpm/10分钟，弃悬液，加入一定量培养基，一般按1:3传，大概每5天左右传一次。

以上操作均应注意无菌。