首先在倒置显微镜下观察生长融合达80%,不需要长满,就准备传代。 倒掉旧的培养基,再用已经高压灭菌过的PBS洗1-2次,我用的是25平方厘米的培养瓶,加入1毫升已经配制好的0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA(0.25%胰蛋白酶是用D-Hanks配制后先用滤纸过滤,再用一次性过滤器过滤除菌,再分装成1ml的小包装,刚好每次用完一个,避免每次反复冻存,会使胰酶的活性下降),加入的量以刚好盖满瓶底为宜。 放到倒置显微镜下观察变化,一旦发现细胞开始变园收缩,大约1-3分钟时间,必要时可以吹打帮助细胞分散,就立即加入培养基中和胰酶,如有EDTA最好要离心(800rpm,5min),弃上清夜,再加入完全培养基吹匀,再分瓶,一般一瓶可以分2-3瓶。放入5%的CO2培养箱,37度培养24小时后观察。 |
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