这一方法较简单，不需要离心，而且消化后细胞很少聚集成团，具体步骤如下：

1、吸尽待传代细胞瓶内的培养液，按1：1 的比例加入适量0.25％胰酶和0.0 2％EDTA（一般100ml培养瓶各加2滴管消化（消化时不要晃动培养瓶，以免消化不完全而导致细胞成片脱落，从而导致细胞成团，无法吹散）。

2、消化致细胞变圆，细胞相互脱离接触但还未从瓶壁脱落时，吸尽胰酶和EDTA。

3、利用残留的胰酶和EDTA继续消化数分钟。

4、加入适量培养液，反复吹打，然后分别接种致新的培养瓶。

注：消化的时间需根据不同细胞摸索确定。