细胞复苏后，在显微镜下观察大约有80%~100%的细胞已经贴壁时用新鲜的培养基换掉原来的培养基，去除DMSO对细胞的毒害，估计复苏到换液的时间为0.5~1.5h。

2~3d细胞长满后传代，传代前先把培养基和0。2%的胰酶从冷库放到室温1~2H，由于冷库中的培养基温度与在温房的温差很大，这样做可以防止细胞"感冒"，然后把培养瓶中的废液倒掉，加入约5~10ml胰酶，把培养瓶平放使胰酶能够浸润到瓶子的表面，放到瓶架上，把瓶架转速调到平常运转的倍，大约1MIN后再把胰酶倒掉，一部分很少即可，拍打瓶子，看见细胞象针眼一样融融的下滑加入培养基就可以了，如果有部分还难以消化下来，使劲摇晃瓶子也能使其掉下。

加入培养基后摇晃瓶子使细胞全部悬浮到培养基中，然后把培养基等份分到其他的培养瓶中，细胞密度大小决定所传瓶数，一般一传四即可。把瓶架调到合适的转速，放到温房继续培养，3天后再行传代，如此反复进行。