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标签: 细胞培养 支原体 污染

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细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时,会严重的影响实验的结果。而细菌、真菌等之微生物污染时,较易自培养基等的外观变化察觉。但是若受到支原体之污染时,细胞之外观较无明显变化,但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。

各国细胞库支原体污染的统计表,如下:
    国家    受支原体污染(%)   报告年度
    USA-FDA   15   1993(past 30 years)
    USA-ATCC   15-20   1992
    Japan-(IFO,RIKEN,JCR 80~30~22   1981 1987-19931998
    Germany-DSM   36   1990-1994
    Argentina   65   1987
    Israel   32   1986-1993
    China   95    1990

造成支原体高污染率的原因为:
    1.支原体size 0.1~0.8 um,无细胞壁,可透过一般过滤膜(0.22-0.45 um)
    2.支原体污染时,没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化
    3.过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式
    4.细胞流通间缺乏品管,造成实验室间的相互污染
    5.研究或操作人员忽略污染问题

而支原体污染来源:
    1.已受污染的细胞
    2.操作人员的疏失
    3.已受污染的培养基、血清
    4.操作环境不良、实验器具不洁等

由于支原体为人体口腔中之正常菌丛,实验室之操作人员的污染亦可能为污染源,须十分注意。而万一细胞已受支原体污染时,最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃,以免污染其它洁净的细胞株。但是若是坚持要作去除支原体污染,有以下几种方法,只不过结果会与原始的细胞特性有差异。

去除支原体污染:
    1. 抗生素处理:BM-cyclin(Roche),MRA(mycoplasma removal agent,ICN),Ciprofloxcin(Bayer),Enrofloxacin(Bayer)
    2. Nucleic acid metabolites:5-bromouracil,Hoechst 33258,bromodeoxyuridine
    3. Anti-sera

预防与控制方面可从以下各点加强注意:
    设备方面:
    1.使用已作支原体测试ok之细胞株
    2.于另一隔离之区域操作未知是否有支原体污染之细胞
    3.使用不添加抗生素的培养基培养细胞
    检测方面:定期以标准的支原体检测方法检测细胞、培养基、血清、ddH2O有否被支原体污染。
    实验操作人员之无菌观念与无菌操作技术之要求。

有关支原体污染之问题与回答:
    Q:应如何避免细胞污染?
    A:细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和支原体。 主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。 严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
    Q:如果细胞发生微生物污染时, 应如何处理?
    A:直接灭菌后丢弃之。

 

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