问: 各位园友,本人今天刚刚做了转染,用的24孔板,质粒是带有荧光的(含neo基因的载体),如果转进去了,下一步就要进行筛选?但是不知道具体该怎么做才能得到稳定转染的细胞? 答: 最好先做以下预实验,摸一下G418的浓度范围,以未转染的细胞做对照,当未转染细胞完全杀死作为最佳筛选浓度。在选择压力下待存活的细胞逐渐形成小克隆后可以传代,随后可以逐步降低G418浓度至原使用浓度的一半作为维持压力。这样多代选择出来的细胞就是阳性克隆,也就是稳定细胞系了。 |
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