传代步骤比较传统: 倒掉培养液->PBS洗2遍->胰酶0.25%消化->倒掉胰酶->加培养基->用吸管吹打均匀->分瓶->放置37度,5%CO2孵箱。 我的体会是: 1、消化时间和实验环境温度也有很大关系,我们实验室条件比较差,不能维持恒温(不过我想大部分实验室目前也还是做不到的)。夏天的时候,消化特别快。但是到了冬天,就很慢,要用手捂老半天。 2、消化到什么程度可以,经验很重要,如果每瓶消化都要通过显微镜观察来判断,首先效率太低,而且还很容易消化过头。对光观察培养瓶,当感觉到有些泛白,瓶角有少许细胞脱离的时候就可以了,倒掉消化液,用手轻拍培养瓶就能脱离了。 3、一般培养的时候,就用5%的小牛血清,只有刚传代的时候才用10%的。感觉这样,细胞不会长的特别快,3-4天换一次液完全没有问题。 |
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