生命经纬网友freett的问题为: 我是新手,第一次培养细胞,按照师姐的配方配了0.05%EDTA-trypsin,但发现消化了十五分钟后,细胞还是基本上全贴在瓶壁上,请问各位高手,这可能是什么原因? 生命经纬网友重剑无锋的观点为: 1、最有可能是你的培养液没有去除干净,因为培养液可以中止消化。所以建议用PBS冲洗两次。然后再加EDTA. 2、加大EDTA的浓度 ,可以选择0.1%与trypsin混合使用,加大以上溶液的体积,可以用2ml。 3、37度温度要够。 4、实时查看,当看到镜下细胞折光度有改变,就是有作用,然后用培养液将细胞冲洗下来。 生命经纬网友cherrypie的问题为: 现在我发现胰酶消化不下细胞,0.25%胰酶,我在培养箱里孵育了5min,竟然还贴壁贴的很好,实在没办法了。请各位高手帮帮忙吧,我怕消化时间长了对细胞有伤害,所以只能放弃消化,就吹打,可是大部分是吹不下来的。 生命经纬网友xinglinzi的观点为: 1、用冰D-Hank's液洗细胞两次; 2、用刚解冻的冷的胰酶(注意不要37度孵育)1-2ml/100ml的培养瓶,开过口的和时间长的都不用。 我遇到过的情况和你的一样,37度孵育的消化不动细胞,原因我也不清楚。用马上解冻的效果特别好,1-2分钟就可以了。我做的是A549细胞。 |
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