我来说说角膜缘干细胞（原代培养）：

吸弃培养液

少量pbs将细胞洗一遍

弃之

0.1%姨酶：0.02%EDTA(1:1)混合液1ml将细胞表面过一遍，弃之

0.1%姨酶：0.02%EDTA(1:1)混合液1ml加入培养瓶，置培养箱3~5分钟，看胞体变圆，用弯头吸管吹打瓶壁黏附的细胞

加DMEM+20%FBS混合液1ml终止消化

800转/分 离心 5分钟

弃上清

离心管中加入1mlPBS,将细胞吹打起来

800转/分 离心 5分钟

弃上清

加入DMEM+20%FBS混合液1ml将细胞吹打起来

细胞悬液装入培养瓶

置培养箱20分钟

倒置显微镜下可见部分干扰的成纤维细胞贴壁

吸出细胞悬液1：2分装新的培养瓶

注：加带血清的培养基终止消化后再吹打容易起泡沫，影响操作，因此选择边消化边吹打。消化完毕后，本人用胎盘兰染色证实90%细胞存活，说明此操作合适。希望与大家探讨！