zy_dalian:请问Lipofectamine2000使用高手:转染后多久加药物? 加LIPO2000后,我选择4小时后换培养基. 那大家是换液后多久加药进行研究的呢?(根据自己研究的不同,药物是不同的); 先谢谢啦! 生命经纬网友silentjill认为: 说明书上不是说的48-72小时后就可以了么? 生命经纬网友出来混的认为: 我是根据转的效率加药的 生命经纬网友applezph认为: 一般Lipofectamine 2000转染后4-6小时换液是指去除含有转染因子的培养液,避免其作用时间过长对细胞产生毒性,但是质粒或RNA转入细胞后仍需要一段时间才能真正观察到效应,一般来说是48-72小时后可以检测到mRNA和蛋白水平的变化。 不太明白你说的加药是怎么回事,只能举个例子吧: 比如做肿瘤细胞KB-A1的MDR基因的转染以抑制其对化疗药物的耐药性,在转染siRNA48-72小时后,可以检测MDR基因在mRNA和相应蛋白水平有无下调,并作药物敏感性试验,观察药物IC50的变化,或者进行其他生物学活性的检测。 希望我的回答能对你有帮助! 生命经纬网友zy_dalian认为: 首先感谢大家的热情回答! 我理解说明书上的意思是48-72小时后是可以收获细胞的.不知是不是这样? 我的意思是在转染后进行药物干预,我的药物是能和转染的质粒进行反应的,质粒中带有药物反应元件的. 我的问题也就是在转染后具体何时进行药物干预?其后维持多久可以收获细胞?(当然是在72小时之内) 生命经纬网友silentjill认为: 我的理解是48小时转染后的细胞已经开始表达目的质粒,故应该在48小时后就是可以得到目的质粒,也就是可以加药干预了.至于加药干预多久收获细胞,当然是与你所用的药物的动力学,信息的传导途径以及质粒的性质等等有关的了. 生命经纬网友zhanglei2423认为: Lipofectamine2000说明书上不是写着:在检测转基因表达前,将细胞在37º;C CO2培养箱中孵育18-48小时吗??? 为何一定要等到48小时侯再给予干预或刺激???我是在24小时侯就把细胞拿来处理了,可以吗?质粒表达时间应该够了吗??谢谢!!! 生命经纬网友applezph认为: 你对说明书的理解是正确的。 对于你所说的药物干预,我认为你需要进行预实验摸条件,转染后什么时候转染的质粒表达量达到最高?如果质粒表达水平可测,找出时间浓度曲线,如果不可测,就做不同时间与质粒药物反应的效应的曲线,何时收获也是一样。通过预实验的优化,你才能找到最适当的加药时间和收获时间! 希望我的意见能对你有帮助! |
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