问:考马斯亮兰法测定细胞总蛋白,要细胞裂解后才能测定吗,如何裂解细胞? 答:将细胞液1 ml用超声波超声10 min(细胞悬液的体积及超声时间需预实验摸索),离心后取上清。或吸取细胞液1 ml于Eppendorf管中,室温高速离心10 min,弃上清液,加入300 μl 处理液(准确称取0.303 g Tris,0.189 ml盐酸,0.8 gSDS,加超纯水溶解至10 ml),100 ℃水浴加热20 min,冷却,再室温高速离心10 min,取上清液测定。超声比较好,后一种方法对测定有影响。 |
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