1、传代前24h先将组织块去除：等到细胞覆盖瓶底80％以上后进行组织块去除操作。可用弯头玻璃吸管将组织块轻轻挑起吸出，确保无组织块留下，以防坏死污染。

2、胰酶消化：倒掉旧培养液，用D－HANKs液清洗两边，加入已预热（37度）10min的0.25％胰酶消化液2ml，2－3min后镜下观察，发现胞质收缩，细胞间隙增大，立即用含胎牛血清的培养液终止消化。

3、弯头吸管吹打细胞：吹打一定时间后到镜下观察，在没吹打起细胞区域继续吹打，动作要柔和。

4、离心：2000转5min。倒掉上清液，加入培养液，吹打成散在细胞。

5、计数和接种。

6、贴壁后更换培养液：由于消化不当或其他原因，接种后的细胞可能会有死细胞及其他杂质影响细胞生长，所以贴壁后（一般6h）要更换培养液。