（1）准备大量的3T3细胞，每个安瓿瓶装1－1000000个细胞，然后冻存。使用的细胞不超过20代。

（2）将3T3细胞加入175cm2的培养瓶中，用含有10％小牛血清DMEM培养。案每平方厘米15000个细胞接种。2天后换液，每4－5天传代。

（3）通过60Gy X射线或Co饲养细胞灭活。被照射的3T3细胞在4度条件下可存放3－4天。

（4）在无照射源的条件下，用丝裂菌素C灭活饲养细胞。

（5）在37度条件下，用400微克每毫升的丝裂菌素C处理单层3T3细胞1h。

（6）用胰蛋白酶消化丝裂菌素C处理过的细胞活，混悬细胞，用含有血清的培养液洗细胞2次。然后，用完全培养液混悬细胞调整细胞密度。