所需的D-HANK'S液和胰酶和用1640配置的适当浓度小牛血清最好都放在37度预热十分钟左右，让它们和细胞生长环境的温度是一样的。这样能达到既对细胞没有外来刺激的作用又能达到反应的最佳条件。

我用的是小培养瓶，方法是:先把旧的培养液倒掉，用D-HANK'S大约3ml洗一次，加浓度为0.1%的胰酶进行消化，添加量只要能均匀的覆盖培养瓶底，大约要1.5ml，最好把瓶盖旋紧放到37度培养箱里培养3-5分钟，在显微镜下观察细胞收缩，变圆，加入3ml的10%的血清终止消化，小心仔细的吹打培养瓶底使细胞尽可能的都脱离培养瓶底，让细胞的悬液转移到离心管(离心管一定要加盖)中1000rpm离心5分钟收集细胞，弃上清，然后加入3ml 12.5%的血清悬浮细胞，转移至新的培养瓶中，一般可以一传二，一传三。具体培养瓶的培养基需要量是根据实际情况而定的。

每次我传代的细胞都长势非常旺盛，因为细胞需要繁殖，所以用浓度高一点的血清培养基能更好的营养细胞，使细胞贴壁生长良好。当然了如果有胎牛血清那效果会更好。