pazj：我的细胞转染48h后在荧光显微镜观察，细胞形态还正常，消化传代以后加G418做稳转，加药以后头两天看，细胞形态还是正常的，但是第三天开始就缩小成小圆点了，感觉就和加胰酶消化后的细胞形态，不知道这个时候细胞是死是活？我还要继续加药吗？还是重新做转染？

生命经纬网友lanniaoxxx认为：

这种情况应该是细胞死亡的形态表现。建议仔细回想步骤，并查找文献，重新做转染

生命经纬网友wlnju认为：

如果细胞转染后48小时还可以的话，一般不是转染试剂的毒性影响。

但是转染后的细胞传代时，状态会稍稍欠佳的

第二，加G418筛选是比较常用的方法，我觉得你是不是之前没有筛选出G418的最小致死量？论坛里有帖子，搜一下就可以了。一般的是将用浓度梯度的G418筛选正常未处理细胞10-14天，选出10-14天内，将所有细胞杀死的最小G418浓度。由于不同厂商不同批号的G418这个阈值是不一样的，所以你必须做试验前筛出这个浓度。我觉得你G418浓度不对。还有，加入以后，细胞是会出现大量死亡。

生命经纬网友wlnju认为：

如果不放心，可以重新做一次，但这次的不要扔，继续培养。有克隆就行。

生命经纬网友lujun298认为：

应该是G418起作用了，一般加入后两三天以后才会有细胞开始死亡，而且细胞在转染后的接种密度不能太大，否则还没等药物起到筛选作用细胞就会长满，如果转染没问题的话细胞经过十天后会有克隆形成的，我的经验都是CHO转染

生命经纬网友pazj认为：

哦，按理说，转染成功的细胞对G418有抗性不会死的，可是我的都死了，到了第七天左右，我发现细胞愈来愈多了，没有荧光的细胞增加了。一个六孔板里只有2或3个荧光的细胞了。

注，转染成功48h时我消化按1：6传代了，操作过程中，我用力过大所剩细胞不多，我在荧光显微镜下看过，大多数是发光的，可是，加药以后就死掉了。活下来的，不发光，现在我一直没扔掉，让它长结果它们长得很好，就是没有荧光。哎，

生命经纬网友wlnju认为：

ls的，一般G418两三天以后有效浓度就只有原来的一半了

所以你要两到三天换一次液的。

生命经纬网友monica912：

我也遇到过这样的问题，这就像是做单抗，得有耐心。

可以把你传过代且加了G418 存活下来的细胞，如果是贴壁的，可以铺上一层琼脂，然后在荧光显微镜下画出荧光的位置，把它挑出来再进行进一步筛选。

祝你成功！

生命经纬网友pazj：

谢谢大家的建议。我现在继续养着这些细胞，有部分圆细胞现在恢复原来形状了，呵呵。不过数目很少，等他长起来还需一段时间。