问：复苏的肿瘤细胞传代多久后，弃之不用并解冻新的细胞？在传代的过程中， 有时细胞长得太满， 都开始死亡了才传，对细胞有什么不良的影响，有没有固定的传代间隔时间？

答：rumex认为培养的代数因细胞不同而不同，肿瘤细胞培养两个月应该不会有问题，但培养的不好就另说了，细胞数量达饱和密度后，细胞遂停止增殖，进入停滞期。停滞期细胞虽不增殖，但仍有代谢活动，继而培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累、pH降低。要及时做分离培养即传代，否则细胞会中毒，发生形态改变，重则从底物脱落死亡，故传代应越早越好。传代过晚（已有中毒迹象）能影响下一代细胞的机能状态。在这种情况下，虽进行了传代，因细胞已受损，需要恢复，至少还要再传1～2两代，通过换液淘汰掉死细胞和使受损轻微的细胞得以恢复后，才能再用。否则影响实验结果，而且我们连续两次培养太密的细胞就不要了。传代时间要你自己掌握哦，因为不同细胞的倍增时间可能不同，你接种的密度也可能不同，所以什么时候传代你也可以自己估计啊，开始培养细胞时，每天计数，估计倍增时间，计算以你接种的密度多久到对数生长期，一般保持在对数期内传代，一周两次差不多了。

liuzeyi2002认为要根据细胞的代谢情况和接种密度，把握传代间隔时间。我们养的是肺癌细胞，A549就代谢很快，如果是1比5稀释传代的，也要3天就传一次代，还有的细胞因为恶性度较高，贴壁不好，需要两天传一次。