白色念珠菌污染

革兰氏染色阳性

中间长梭型的是正在分裂的念珠菌

生命经纬网友布兰卡的观点为：

我个人感觉，操作之前酒精擦手消毒非常重要，因为环境再差，无菌台里一般是没问题的，但是，污染往往在这里操作时发生，因此，个人手的卫生非常重要，白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类（尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着），我认为绝大多数污染是我们自己带进去的，因此，如果环境不是太差，那就找找自身的原因。

生命经纬网友dsh1205的观点为：

灭菌水,是否有必要我也不太肯定。其实这一点是很容易办到的，有总比没有好。多注意一些可能的因素，对细胞总是有力的。被污染总是很麻烦的，细胞长得不好不说，还影响实验进程。

我认为有两个环节很重要，操作台及温相。我们操作前、后都要紫外杀菌30min，而且保持操作台通风设施正常。我们的温相好像从来没有用酒精擦过，更没用紫外照射。我们开温相时，先清洁剂洗手，在酒精擦手，范围与手术洗手差不多，时间一般在几秒内。另外，我自己将瓶放回相中时，还对瓶体进行酒精擦洗。

当然还有给细胞换液也要注意了，吸管尽量不要深入瓶内，要深入瓶内的最好先在酒精灯上烧一烧等等。

HepG2细胞，荧光染色检测支原体

支原体污染检测

在上面的支原体检测图片里没大片的针状点，但不敢肯定个别细胞核外的小点是不是支原体，可是要有也不应该就这么几个啊？（细胞一共培养了40小时）

生命经纬网友bianmin8024认为：

这么大面积的污染，你可以看看是不是做这批细胞时操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。其实我觉得在每次试验前，最好简略写一下操作步骤做到心中有数。这样可以避免实验中的忙乱。既然现在已经污染了，就全部更换你的器皿。培养箱的水没有必要用无菌水，但最起码要是蒸馏水。

以上图片细胞系念珠菌污染

处理办法：扔掉，善后办法，养成良好的无菌操作的习惯，拿70％酒精擦手，擦超净台，擦培养瓶，擦培养基瓶，各种瓶子的口多拿火焰烧灼。就不再会发生细菌污染。

支原体污染电镜照片(X30k),煎蛋状和其他形状

支原体污染电镜照片（X30k）

支原体污染电镜照片（X12k）

支原体污染电镜照片（X12k）

支原体污染电镜照片（X12k）

你的培养液应该一两天内很快变混浊．刚开始小虫杆状成串，不怎么动，多了以后就不成串了，移动迅速，是这样吗？如果是，细菌培养液是被洋葱佰克霍尔德菌污染了。

洋葱佰克霍尔德菌（Burkholderiacepacia）原属假单胞菌属，是植物病原菌，因引起洋葱患病而得名，是医院感染病原菌之一。

洋葱伯克霍尔德菌是一种广泛存在于土壤及水中，与医院感染密切相关的革兰阴性杆菌，尤其为免疫缺陷及肺囊性纤维化患者易感染细菌之一。它可以在无糖的培养基中生长。在医院环境中常可污染自来水、体温表、喷雾器、静脉导管、导尿管、静脉输液管等，造成院内传播，导致多种医院感染，如败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染、深部脓肿和眼结膜炎等，尤其采用导管植入进行治疗者，更容易引起感染。洋葱伯克霍尔德菌对多种抗菌药具有天然的耐药性。耐药现象严重，治疗可选择复方磺胺甲懒唑、哌拉西林,三唑巴坦、哌拉西林和头孢他啶等抗菌药物。

参考文献：洋葱伯克霍尔德菌86株的分布与耐药性 尤荣开，等 中国抗感染化疗杂志 2003年2月28日第3卷第1期

生命经纬网友wangyz认为：

看到上面很多战友细胞都被霉菌污染了，而很多是由于培养箱污染的原故，我想说的是其实这种污染是很容易避免的，我养细胞近一年了，养过很多种细胞，还从来没发生过类似的情况，培养箱的水如上面有位战友所讲，加叠氮钠使其浓度到千分之零点二的（有剧毒，配置是小心勿沾到皮肤上）就可以防腐了，我们在第一使用培养箱或万一被污染的情况下通常的做法是在常规的用千分之一新洁尔灭和75%的酒精搽拭培养箱后，加入消毒过的水（普通的双蒸水高压即可，叠氮钠可先配成1%贮存浓度，用不着消毒因为微生物是不能成活的），在往培养箱中加水前放细胞室开紫外灯照20-30分钟，此时每500毫升的水加1毫升的贮存浓度叠氮钠，混匀，到入培养箱中即可。

上面的过程我想很多人是这么做的，应该没问题，至少你首次不会带入污染，我想提醒的是在每次从培养箱中取出细胞到显微镜下观察前，一定要打开细胞室的紫外灯照20-30分钟（手伸进培养箱前当然要用酒精棉球搽拭，不过一般都能做到），观察完将细胞放入培养箱前用酒精棉球搽拭细胞培养瓶后再放入。我经常看到有些人是一去细胞室先从培养箱中取出细胞观察，再做决定，如果需要处理则再开始打开细胞室的紫外等消毒。这样做是省事但极易带入细菌、霉菌等造成污染，因为你衣服上（哪怕你穿细胞室的工作服但没照过）以及细胞间的环境中就有细菌、霉菌等微生物，当打开培养时空气一流通这些微生物就有可能进入，而培养箱内的环境又极适合微生物的生长。所以我说宁可麻烦一点，但也值得！实验只要不因失误重做哪怕准备时间长一点做起来都算快的。

支原体污染

传说中的黑焦虫，长得暴快。24小时就满视野都是了。用PBS洗洗，细胞竟然还活着。下面是20倍镜下得视野。

垂体瘤原代培养真菌污染

生命经纬网友炉灰渣认为：

污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！但对新手来说，又满头雾水！来说说我的经验，决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要求自己遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好，越“罗嗦”越好！

我发现在提取需要组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）

另外，每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面，不消毒的器械（如移液枪，冰块等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处进行；使用无菌台后，再用酒精擦全台面，紫外照20分！

还有，做到绝对无菌，那不可能！但我们可以做到最大限度的减少含菌量！

使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。

包装腺病毒所培养的293细胞出现污染，拿到医院检测中心检测证实为格兰氏阳性杆菌。经过摸排，认定罪魁祸首是转染试剂盒已遭污染。

HSC-T6真菌污染

真菌污染，树枝状的。高倍镜

真菌污染，树枝状的

真菌污染：（倒置）

油镜下杆菌的污染，图片经瑞氏染色

霉菌污染

白色念球菌

特征：似乎无处不在，而且顽固的很。长的暴快（12h就能让细胞上面密布）。培养液澄清。低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。

生命经纬网友belindafly认为：

我们实验室细胞培养的条件比较差，因此细胞培养箱很少像大家说的那样经常用酒精擦拭和更换水盘，但是平时细胞却极少发生污染，我们的经验是在关键的操作上要特别小心，例如

1.滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。

2.凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。

3.初学者一般可以用培养瓶养细胞，个人认为瓶污染的机率要比皿小。

4.注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。

5.操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。

细胞细菌污染高倍镜图片（1000倍），瑞氏染色

典型的霉菌污染，肉眼看到白色的团块或白点，镜下呈丝状。400倍图片如下：

转染了腺病毒4天的293细胞 可能是葡萄球菌污染吧 我猜得 不是太清楚，100倍

这是在内皮细胞培养中发现的一个霉菌