问: 在本版里有看到过有关caspase-3的检测方法 (1):免疫细胞化学检测caspase-3蛋白的表达,用悬浮的细胞 (2):western blot 理想结果:caspase-3有32KD的条带外,还出现了20KD和10KD大小的条带,表明caspase- 3被活花 (3):RT-PCR检测mRNA的表达,用凝胶成像分析系统处理,可以半定量。 请问是否有更详细一些的实验步骤 还有这3种方法之间有没有什么优缺点,那种比较容易出结果。 答: 各种方法都有自己的优缺点,关键是根据实验目的选择适合的方法。 检测mRNA水平的表达,RT-PCR是广泛应用的比较好的方法; 检测蛋白水平的表达,可以选择免疫细胞化学,Westen-Blot等,前者可以在细胞内定位但定量效果不佳,后者操作比较复杂,如想在较高水平杂志发表论文最好选择此方法。检测Caspase-3活性还可以选用流式细胞仪来做,且可同时测定Caspase-8等的活性(多通路)。 |
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