1) 细胞消化液的配制及存储：我采用的是0.25%Trypsin+0.05%EDTA的消化液，BUFFER采用的是D-Hank's液。配完后分装成4-5ml/tube，于-20度冰箱中储存。

2) 消化前的处理：当细胞生长至亚融和状态需要传代时，提前半小时将配好的消化液放在细胞培养孵箱中预热，同时将配好的高压无菌的D-Hank's液也进行预热。

3) 消化细胞：将预热的D-Hank's液洗细胞2次，2ml/25cm2，然后再加入预热的消化液，作用3-5min，并反复振荡，镜下观察。当细胞被消化成单个圆球状时，加入等体积的培养基中止消化，然后反复吹打，将消化后的细胞悬液，全部吸出后置于离心管中离心，1000rpm，10min。

4) 传代接种细胞：离心完毕后，弃去上面的上清，加入新鲜预热的培养基，并计数，按要求接种的密度接种到新的培养瓶中即可。

这种方法的优点是:细胞消化彻底，损伤小，接种均匀，易于控制密度等。