爱吃葡萄的猫：我做稳定转染，挑完单克隆用RT-PCR鉴定时，批不出我转染的那段基因表达，但是载体上的新霉素抗性基因能批出来，我鉴定了大概20个单克隆都是这样，开始以为是引物有问题，后来鉴定瞬时转染时能表达，应该就不是引物和条件的问题。大家有没有遇到过这种情况？帮我分析一下是什么原因？急等！

生命经纬网友Sayid认为：

这种情况太常见了，也是我们还要对抗性阳性克隆进行PCR鉴定的直接原因。

由于目的基因表达阳性的克隆往往生长压力更大，所以生长旺盛的克隆更多是仅仅整合了neo基因的克隆，尤其是在单克隆化不及时的情况下，目的基因阳性克隆甚至因生长竞争而被排除。如果你的基因没有什么毒性，对此唯一的办法，就是继续单克隆化筛选。

本版精华贴，前辈讲的极好，建议你仔细看看

http://www.biox.cn/bbs/post/view?bid=66&id=70221&sty=1&tpg=6&age=0

生命经纬网友nopain认为：

我做的也是这样。单克隆完后做WESTERN没做出来，现在瞬转做WESTERN也没做出来，怀疑是蛋白没有表达。