我曾经做过原代培养的成骨细胞传代和骨髓基质细胞以及cos7细胞的传代。基本的操作过程都是：

倒掉或者吸掉培养基

37度预温的PBS洗涤细胞3次

加入浓度为0.1％的胰酶和0.05％EDTA进行消化，添加的量看所用的培养瓶大小，可以在室温下消化，也可以在37度进行消化

在显微镜下观察，等细胞成片脱离时，加入3毫升含血清培养基中止消化

将细胞悬液转移到离心管中1000rpm离心5分钟收集细胞

弃上清，再加入5毫升含血清培养基重悬细胞，再同样转速和时间离心一次

弃上清，根据实际需要添加适量培养基重悬细胞接种-->37度，5％二氧化碳静置培养。

我的感觉消化时应把握的原则是：胰酶的浓度不要太高，消化时间可以适当延长，这样可以保证达到满意的消化效果。消化时可以在室温下进行并同时在显微镜下观察，看消化的情况决定何时中止消化。而且在室温下消化可以比在37度下消化速度更慢一些，更容易掌握。