我培养过不少肺癌细胞(人类),其中绝大部分都是贴壁细胞,具体如: (1) A549(肺腺癌) (2) NCIH446(小肺细胞癌) (3) 801(非小肺细胞癌) (4) NCIH460 (大细胞肺癌) 在消化传代过程中,步骤基本一致: 吸去旧的培养液->用Hanks'(1X)清洗一两次->加入一定量的消化液(Trpsin-EDTA)->置显微镜下观察,待细胞大部分变圆时,回到超静台->吸去消化液->加入一定量的新培养液->反复吹打细胞->再置显微镜下观察,直到细胞全部悬浮起来->吸出一部分加入新的培养瓶中->最后再补充加入一定量新的培养液(RPMI1640with 10% FBS). 注意: 吹细胞时尽量多吹边角儿,此处细胞生长的多.另外吸出细胞前要混匀. 另注:消化液的配制方法: Trpsin-EDTA(1X)--0.25% Trpsin with EDTA-4Na prepared with 2.5g Trpsin(1:250) and 0.38g EDTA-4Na/L in HBSS. |
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