1、将静脉血20ｍl用ACD抗凝剂以容积比血：抗凝剂＝9：1抗凝处理

2、按血：分离液＝1：2注入国产淋巴细胞分离液上层，400g 20℃离心30分钟

3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g，10min洗三次

4、获得细胞可做分选或其他实验。

体会：

1、实验中我用过肝素方法抗凝，但效果不好，因为肝素抗凝后交接层混浊，洗涤后没有细胞。后来是一位老师推荐我用ACD抗凝剂，效果very good

2、实验用的是国产淋巴细胞液（天津TBD），没有用过进口的Ficoll/Paqnl

3、分层时的离心温度只能在20－25℃，过高细胞容易死亡或破坏，过低分层效果不好。我刚开始不知道，试过用5℃离心，其结果是一塌糊涂

4、不能使用角离心机。